HIV-Iの核移行を阻害する抗HIV薬の開発

开发抑制HIV-I核转位的抗HIV药物

• 批准号: 18659135
• 负责人: 間 陽子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659135/
• 关键词: HIV-1アクセサリー蛋白質Vpr; 核輸送担体importinα; 低分子化合物; 核移行阻害; 結合阻害; マクロファージへの感染阻害; 最適化; 共結晶構造解析

以前に申請者らは、ヒト免疫不全ウイルス1型(HIV-1)アクセサリー蛋白質VprがImpαのみを介して核移行する新規核移行機序を有することを発見した。さらに、Vprと核輸送担体importinαとの結合がマクロファージへのHIV-1感染に必須であるということを世界に先駆けてみいだした。そこで、Vprとimportinαとの結合を阻害する低分子化合物を開発し、新たなる抗HIV-1薬の創製を目指した。まず、大量精製したGSTとHis tag融合VprおよびImpαを用いて、VprとImpαとの結合を正確、簡便および高感度に検出するためのELISA binding法を構築した。このELISA法を用いて、2000化合物からスクリーニングして、VprとImpαの結合を阻害する低分子化合物49種を選択した。その内11種の化合物が、GST pull down法においてVprとImpαの結合を、2種類がin vitro核移行解析においてVprの核移行を阻害した。また、同定された化合物は細胞内で主に作動しているclassicalなNLSの核移行に効果を及ぼさなかったと同時に、ミトコンドリアの活性を指標とするMTT法により、細胞傷害性が低いことが明らかとなった。興味深い事に、解析した1種類がマクロファージにおけるウイルス感染を阻害した。この化合物が、VprとImpαのどちらに結合するかをBlue NATIVE PAGEを用いて解析した結果、化合物はVprに結合しスメア状にシフトしていることが確認された。現在、大規模スクリーニングと化合物の最適化のためにVprとImpα複合体のX線結晶構造解析を進めている。一方、HIV-1感染の初期過程を可視化するために、的かつ蛍光バイオイメVpr蛍光蛋白質融合Vprを用いた蛍光バイオイメージング技術を確立した。

に applicants before ら は, ヒ ト immune insufficiency ウ イ ル ス type 1 (HIV - 1) ア ク セ サ リ ー protein Vpr が Imp alpha の み を interface し て nuclear migration す る new rules on nuclear migration machine sequence を have す る こ と を 発 see し た. さ ら に, Vpr と nuclear transport supporter importin alpha と の combining が マ ク ロ フ ァ ー ジ へ の infected with HIV - 1 に must で あ る と い う こ と を world に 駆 first け て み い だ し た. そ こ で, Vpr と importin alpha と の combining を resistance against す る low molecular compound を open 発 し, new た な る HIV - 1 薬 の created を refers し た. ま ず, a large number of refined し た GST と His tag fusion Vpr お よ び Imp alpha を with い て, Vpr と Imp alpha と の combining を right, simple お よ び Gao Gan degrees に 検 out す る た め の ELISA binding method を build し た. を こ の ELISA method with い て, 2000 compounds か ら ス ク リ ー ニ ン グ し て, Vpr と Imp alpha の combining を resistance against す る 49 kinds of low molecular compounds を sentaku し た. そ の within 11 が の compounds, GST pull down に お い て Vpr と Imp alpha の を, 2 species が nuclear migration in vitro analytical に お い て Vpr の nuclear migration を resistance against し た. ま た, with さ れ た compound は intracellular で main に actuation し て い る classical な NLS の nuclear migration に unseen fruit を and ぼ さ な か っ た と に, at the same time ミ ト コ ン ド リ ア を の activity index と す る determined by MTT method に よ り, low cell damage が い こ と が Ming ら か と な っ た. Interesting matters に, analysis of た た1 types が ロファ ロファ ジにおけるウ ジにおけるウ ジにおけるウ ス ス ス infection を damage た. こ が の compounds, Vpr と Imp alpha の ど ち ら に combining す る か を Blue NATIVE PAGE を with い て parsing し た results, compound は Vpr に combining し ス メ ア shape に シ フ ト し て い る こ と が confirm さ れ た. Now, large-scale ス ク リ ー ニ ン グ と compound の optimization の た め に Vpr と Imp alpha complex analytical を の X-ray crystal structure into め て い る. Side, infection of HIV - 1 の を early process visualization す る た め に, the か つ 蛍 light バ イ オ イ メ Vpr 蛍 light fusion protein Vpr を with い た 蛍 light バ イ オ イ メ ー ジ ン グ technology を establish し た.

项目成果

Human immunodeficiency virus type 1 Vpr induces cell cycle arrest at the Gl phase and apoptosis via disruption of mitochondorial function in rodent cells

人类免疫缺陷病毒 1 型 Vpr 通过破坏啮齿动物细胞的线粒体功能诱导细胞周期停滞在 G1 期并诱导细胞凋亡

• 发表时间: 2006
• 期刊: Microbes Infect. 8
• 作者: Azuma A.;Matsuo A.;Suzuki T.;Kurosawa T.;Zhang X.;Aida Y.
• 通讯作者: Aida Y.

HIV-1 Vpr inhibits pre-mRNA splicing via interaction with spliceosome-associated protein 145 (SAP 145)

HIV-1 Vpr 通过与剪接体相关蛋白 145 (SAP 145) 相互作用抑制前 mRNA 剪接

• 发表时间: 2007
• 期刊: Microbes Infect. (印刷中)
• 作者: Hashizume C.;Kuramitsu M.;Isogai M.;Kamata M.;Aida Y.
• 通讯作者: Aida Y.

A novel nuclear import of Vpr promoted by importin α is crucial for HIV-1 replication in macrophages

由导入蛋白α促进的新型Vpr核导入对于巨噬细胞中的HIV-1复制至关重要

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Virol. (印刷中)
• 作者: Nitahara-Kasahara Y.;Kamata M.;Yamamoto T.;Zhang X.;Muneta K.;Miyamoto Y.;Iijima S.;Yoneda Y.;Tsunetsugu-Yokota Y.;Aida Y.
• 通讯作者: Aida Y.