新しい重金属耐性因子の検索及び同定

新的重金属抗性因子的寻找与鉴定

• 批准号: 09877078
• 负责人: 三浦 伸彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877078/
• 关键词: カドミウム; 耐性因子; メタロチオネイン; ノックアウトマウス; カドミウム耐性細胞; ディファレンシャルディスプレイ

カドミウム(Cd)に対する耐性因子としてメタロチオネイン(MT)が知られているが、MTだけではその耐性獲得機構を説明できないようなCd耐性細胞の例もいくつか存在し、また遺伝子操作により細胞内MTレベルを上昇させてもCdに対して耐性が認められないとの報告もあることから、MT以外の重金属耐性因子の存在が予想される。そこで本研究ではMT遺伝子欠損マウスの肝臓から樹立した不死化細胞(KO-cell)よりCd耐性細胞を単離し、この細胞にCd耐性を与えている因子の検索・同定を試みた。その結果、まずKO-cellに90%致死量の塩化カドミウムを添加して生き残って増えてきた細胞を得、この操作を3回繰り返すことによってCdに耐性を示す細胞集団(KO-Cd cell)を単離することに成功した。本細胞は親株であるKO-cellに比べてCdに対して約2倍の耐性を示すと共に、無機水銀に対しても耐性を示したが亜鉛に対しては殆ど耐性を示さなかった。KO-Cd cellはMT遺伝子を欠損しているため、この耐性細胞はMT以外の細胞内因子の量的(或いは質的)変化により耐性を獲得した可能性が高い。そこで次にKO-cellとKO-Cd cellとの間で発現量の異なる遺伝子をDifferential Display法を用いて検索した。その結果、KO-Cd cellで再現性良く高発現している5種のPCR産物を確認することができた。現在これらPCR産物の塩基配列解析を行っているが、今後その情報を基にしてcDNAを単離し、Cd耐性との関連を調べていく予定である。

The tolerance factor (Cd) was linked to the Cd tolerance factor (MT). The mechanism was informed that the Cd tolerance cell was detected in the presence of MT in the cell. The Cd tolerance test was not reported in the laboratory. Except for MT, there is an expected tolerance factor for heavy metals. In this study, MT tolerance was isolated from KO-cell, Cd tolerance was isolated from cells, Cd tolerance was the same as that of other factors in this study. The result of the test, the KO-cell 90% lethal dose, the addition of the raw and disabled cell, the recovery of the cell, the return of the cell, the tolerance of the Cd, the cell collection (KO-Cd cell) and the success of the operation. The tolerance of this strain of KO-cell is about 2 times higher than that of conventional Cd, indicating that the tolerance of this strain is about 2 times higher than that of the other two. The possibility of KO-Cd cell MT tolerance is higher than that of the amount of extracellular factors (or intracellular factors) outside MT. This is the second time to use the KO-cell KO-Cd cell method to measure the size of the Differential Display method. According to the results of the test, the results of the KO-Cd cell test showed that there was no significant difference between the results of the test and the results of the KO-Cd cell test. At present, the basic configuration of PCR materials is analyzed, and in the future, the basic information will be separated from cDNA, and the Cd tolerance will be determined.

项目成果

Masao Kawakita: "Nucleotide Sugar Transporters : Elucidation of Their Molecular Identity and Its Implication for Future Studies" Journal of Biochemistry. 123(5)(印刷中). (1998)

Masao Kawakita：“核苷酸糖转运蛋白：其分子特性的阐明及其对未来研究的影响”《生物化学杂志》123(5)（出版中）。