顆粒膜細胞のTranszonal Projectionに関する研究

ウシの初期胞状卵胞から採取した後，裸化してTranszonal Projection（TZP）を消失させた卵母細胞を，異なる発達段階の卵胞から採取した顆粒膜細胞または壁顆粒膜細胞と共培養して発育培養を行い，以下の結果を得た。１）二次卵胞（直径0.2～0.4 mm）から採取した顆粒膜細胞を裸化卵母細胞と共培養すると，初期胞状卵胞（直径0.5～0.7 mm）の壁顆粒膜細胞を用いたこれまでの報告と同様に，卵母細胞－顆粒膜細胞複合体を再構築した。また，二次卵胞の顆粒膜細胞から卵母細胞に向かってTZPが伸長され，TZP数は経時的に増加した。さらに発育培養を続けると，複合体は発達して卵胞腔様構造を形成し，発育培養14 日後，複合体内の卵母細胞は直径約115 μmまで発育し，その半数以上が成熟能力を獲得した。一方，後期胞状卵胞（直径4～6 mm）から採取した壁顆粒膜細胞を裸化卵母細胞と共培養すると，裸化卵母細胞との接着は弱く，壁顆粒膜細胞はTZPをほとんど伸長しなかった。壁顆粒膜細胞は次第に固く凝集し，複合体は発達せず，卵胞腔様構造は形成されなかった。また，複合体内の卵母細胞は発育せず，退行するものが多くみられた。２）二次卵胞，初期胞状卵胞，後期胞状卵胞から採取した顆粒膜細胞，壁顆粒膜細胞および卵丘細胞のRNA-seq解析を行ったところ，二次卵胞の顆粒膜細胞は卵胞の発達に伴って壁顆粒膜細胞と卵丘細胞の2方向へと分化することが示された。また，TZPの伸長能で細胞を区別して発現遺伝子を比較すると，Fアクチンの形成や糸状仮足（filopodium）の形成に関連する遺伝子のいくつかに差があることが見出された。

ウシの初期胞状卵胞から採取した後，裸化してTranszonal Projection（TZP）を消失させた卵母細胞を，異なる発達段階の卵胞から採取した顆粒膜細胞または壁顆粒膜細胞と共培養して発育培養を行い，以下の結果を得た。１）二次卵胞（直径0.2～0.4 mm）から採取した顆粒膜細胞を裸化卵母細胞と共培養すると，初期胞状卵胞（直径0.5～0.7 mm）の壁顆粒膜細胞を用いたこれまでの報告と同様に，卵母細胞－顆粒膜細胞複合体を再構築した。また，二次卵胞の顆粒膜細胞から卵母細胞に向かってTZPが伸長され，TZP数は経時的に増加した。さらに発育培養を続けると，複合体は発達して卵胞腔様構造を形成し，発育培養14 日後，複合体内の卵母細胞は直径約115 μmまで発育し，その半数以上が成熟能力を獲得した。一方，後期胞状卵胞（直径4～6 mm）から採取した壁顆粒膜細胞を裸化卵母細胞と共培養すると，裸化卵母細胞との接着は弱く，壁顆粒膜細胞はTZPをほとんど伸長しなかった。壁顆粒膜細胞は次第に固く凝集し，複合体は発達せず，卵胞腔様構造は形成されなかった。また，複合体内の卵母細胞は発育せず，退行するものが多くみられた。２）二次卵胞，初期胞状卵胞，後期胞状卵胞から採取した顆粒膜細胞，壁顆粒膜細胞および卵丘細胞のRNA-seq解析を行ったところ，二次卵胞の顆粒膜細胞は卵胞の発達に伴って壁顆粒膜細胞と卵丘細胞の2方向へと分化することが示された。また，TZPの伸長能で細胞を区別して発現遺伝子を比較すると，Fアクチンの形成や糸状仮足（filopodium）の形成に関連する遺伝子のいくつかに差があることが見出された。