視神経の軸索投射におけるタンパク質間相互作用のダイナミックな制御

视神经轴突投影中蛋白质-蛋白质相互作用的动态控制

基本信息

批准号：
13J40151
负责人：
羽毛田聡子
金额：
$ 3万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1) larとptp69Dの2重変異体のPtp69Dによるレスキュー実験LAR と類似した構造を持つPtp69DについてLarと同様にどの部分が機能しているのかを確かめる実験を行った。その結果、Ptp69Dでは第一脱リン酸化ドメインの活性がなくてもR7の投射はLar単変異株と同様のM3層まで回復するが、第一、第二脱リン酸化ドメインの両方の活性を失うと、2重変異株の表現形は回復しなかった。LarによるレスキューではM6層まで回復したことと合わせると、LarとPtp69D はラミナを通過し、メダラ内に侵入するところまでは機能を重複しているが、メダラ内での層特異的投射には個別の働きを持っていると考えられる。2) larとptp69Dの2重変異体におけるR7軸索投射機構の発生段階別解析larとptp69Dのヘテロ変異株にlarとptp69DのRNAiを用いて二重変異株を作成し、FLPase依存的にGFPを発現するマーカーを用いてR７を標識し、3例幼虫後期から成体に至るまで、R7の軸索がどのような過程を経て最終投射先に到達しているのか発生段階別に観察した。その結果、3例幼虫から蛹化後24時間まではR7軸索はほぼ正常に投射するが、36時間後に縮退が始まりさらに、42時間になると縮退は顕著になり、軸索末端の成長円錐の構造が破壊され、軸索が短くなっていく様子が観察された。48時間ではほぼすべてのR7軸索がメダラ層から消失していた。この結果から、LarおよびPtp69Dは、標的層に到達した後に標的層を認識し、伸長を安定して継続するために必要であることがわかった。3) LarおよびPtp69Dの2重変異株と相互作用する分子trio、Ena、ablが二重変異株と相互作用するかどうか、larとptp69Dの二重RNAiとtrio、Ena、ablのRNAiおよび強制発現系を組み合わせ、遺伝学的相互作用の有無を観察した。その結果、AblはLarおよびPtp69Dの共通の下流経路に対して抑制的に働き、Trioは促進的に働いていることが分かった。

1）我们进行了一个实验，以检查哪个部分在PTP69D中起作用，该零件的结构与LAR的结构相似，LAR和PTP69D的双重突变体。结果，即使主要去磷酸化结构域的活性在PTP69D中不活跃，R7投影也被恢复到类似于Lar单个突变体的M3层，但是当丢失了第一和第二个去磷酸化域的活性时，双重突变体应变的表型都不会恢复。结合LAR恢复到M6层的救援的事实，LAR和PTP69D具有重叠的功能，直到它们穿过薄片并进入Medara，但人们认为它们在Medara中具有独立的层特异性预测功能。 2）通过发育阶段分析了LAR和PTP69D双重突变体中R7轴突投影机制的发展阶段分析，并使用LAR和PTP69D的PTP69D异源物创建了双突变体，并使用PTP69D RNAi的PTP69D杂型物，并使用R7使用标记在flpase依赖的过程中表达GREN的标记，并在R7量中标记了R7的标记。开发，从三种情况下从幼虫到成年人。结果，观察到，在成cupation后至24小时内，在三种情况下，R7轴突几乎通常从幼虫投射出来，但是脱落率在36小时后开始，在42小时后，脱位率变得更加明显，并且在轴突末端的生长锥体的结构被中断，导致轴突变得更加舒适。在48小时时，几乎所有R7轴突都从Medara层消失了。这些结果表明，LAR和PTP69D需要在到达目标层后识别目标层并保持稳定的扩展。 3）我们观察到与LAR和PTP69D的双重突变菌株相互作用的分子是否与双重突变菌株相互作用，并且使用LAR和PTP69D的双RNAi以及三重奏，ENA，ABA，ABL，ABL和强制表达系统的RNAi观察到遗传相互作用的存在或不存在。结果表明，ABL对LAR和PTP69D的常见下游途径进行了压抑，而三人则促进了促进。