脂質脱リン酸化酵素阻害によるリソソーム機能賦活・長寿モデルマウスの開発

抑制脂质去磷酸化酶激活溶酶体功能及长寿模型小鼠的发育

• 批准号: 21659067
• 负责人: 佐々木 雄彦
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659067/
• 关键词: リン脂質; イノシトールリン脂質; 長寿

イノシトールリン脂質の一つであるPI(3,5)P_2が消失しているphosphatidylinositol phosphatekinase typeIII (PIPK III)遺伝子欠損細胞ではリソソーム機能が大幅に低下していることを見出した。さらに、この知見に基づき新たに作製した神経細胞特異的PIPK III欠損マウスは、神経細胞特異的にオートファジーを阻害したマウスと同様の表現型を示し、短寿命となった。そこで、逆に細胞内のPI(3,5)P_2を増大させることでリソソーム機能を賦活化し、タンパク質分解経路を亢進させて、長寿マウスを樹立できないかと試みた。このために、ホスファチジルイノシトール3,5-二リン酸を分解するイノシトールリン脂質ボスファターゼSac3に着目し、その活性消失変異体をゲノムに置換挿入する形で、Sac3活性消失変異体ノックインマウスを作製した。しかし、残念ながら、このマウスは短寿命の表現型を呈した。[^<32>P]無機リン酸、[^3H]myo-inositol標識した細胞から、脂質を抽出し、脱アシル化したのち、HPLCにより分離を行うことで、細胞内イノシトールリン脂質量を測定したところ、予想に反して、ボスファチジルイノシトール3,5-二リン酸レベルは低下していた。培養細胞での共発現実験でSac3とPIPK IIIが直接会合することが確認されたことから、Sac3は分解酵素としてのみならずPIPK IIIの活性制御因子としても機能することが示唆された。今後、PIPK IIIの過剰発現や他のボスファターゼの機能阻害によって、検討を継続する予定である。

PI(3,5)P_2 disappeared in the absence of phosphotidylinositol phosphokinase type III (PIPK III), which was found to be significantly lower than that of normal cells. In addition, the gene expression of PIPK III was detected by the gene expression system. The PI(3,5)P_2 in the cell was increased, which resulted in the activation of the function of the system, the enhancement of the quality decomposition pathway, and the establishment of a long life. The activity of Sac3 in the lipid matrix was reduced by the substitution of Sac3 in the form of a 3,5-diamino acid. The phenotype of short life span is presented. [^<32>P] Inorganic acid,[^3H]myo-inositol identification, cellular separation, lipid extraction, purification, HPLC separation, determination of intracellular lipid mass, expected reaction, and presence of 3,5-diamino acid. The co-expression of Sac3 and PIPK III in cultured cells was confirmed by direct conjugation, and the function of Sac3 as an active inhibitor of PIPK III was demonstrated by enzyme digestion. In the future, PIPK III's development and other functional barriers will be discussed.

项目成果

Sequential regulation of DOCK2 dynamics by two phospholipids during neutrophil chemotaxis.

• DOI: 10.1126/science.1170179
• 发表时间: 2009-04-17
• 期刊: Science (New York, N.Y.)
• 作者: Nishikimi A;Fukuhara H;Su W;Hongu T;Takasuga S;Mihara H;Cao Q;Sanematsu F;Kanai M;Hasegawa H;Tanaka Y;Shibasaki M;Kanaho Y;Sasaki T;Frohman MA;Fukui Y
• 通讯作者: Fukui Y

The Ptdlns (3,4) P (2) phosphatase INPP4A is a suppressor of excitotoxic neuronal death.

Ptdlns (3,4) P (2) 磷酸酶 INPP4A 是兴奋毒性神经元死亡的抑制剂。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Nature
• 影响因子: 64.8
• 作者: Sasaki J;Kofuji S;Itoh R;Momiyama T;Takavama K;Murakami H;Chida S;Tsuya Y;Takasuga Eguchi S;Asanuma K;Horie Y;Miura K;Davies EM;Mitchell C;Yamazaki M;Hirai H;Takenaa T;Suzuki A;Sasaki T.
• 通讯作者: Sasaki T.

Allergic airway hyperresponsiveness, inflammation, and remodeling donot develop in phosthoinositide 3-kinase γ-deficient mice

磷脂酰肌醇 3-激酶 γ 缺陷小鼠不会出现过敏性气道高反应性、炎症和重塑

• 发表时间: 2009
• 期刊: J Allergy Clin Immunol. 123
• 作者: Takeda M.;et al.
• 通讯作者: et al.

分子から個体へと深化する 脂質生物学

脂质生物学从分子深入到个体

• 发表时间: 2010
• 作者: 佐々木雄彦;横溝岳彦;竹縄忠臣
• 通讯作者: 竹縄忠臣

Role for 3-Phosphoinositide Metabolism in vivo.

3-磷酸​​肌醇体内代谢的作用。

• 发表时间: 2011
• 作者: Sasaki;T.
• 通讯作者: T.