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内在性受容体の特異的ｏｎ　ｃｅｌｌケミカルラベリングと時空間的機能解析

内源性受体的特异性细胞化学标记和时空功能分析

基本信息

批准号：
13J04988
负责人：
三木卓幸
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Zn(II)に応答性を有するラベル化剤を開発し、Zn(II)条件的なproteomicsを考案し、実証した。Zn(II)イオンは細胞内外でシグナル伝達物質として働ことが示唆されており、動的に局在が変化する。Zn(II)シグナル伝達に関わる蛋白質を調べる手法は従来、総括的な解析ではなかった。申請者は、Zn(II)シグナル伝達に関わるタンパク質を総括的に調べる手法として、ケミカルラベル化を応用した新しい”conditional プロテオミクス”を開発した。これは、有機化学的手法によって、生細胞中の高濃度Zn(II)環境下に存在している蛋白質を選択的にラベル化する。ラベル化蛋白質を細胞破砕後に精製し、LC-MS/MS解析によって同定する方法である。まず、申請者はZn(II)との結合によって反応が活性化するラベル化剤”AIZin”を開発した。これは、蛋白質のラベル化に有用な求電子反応基Acyl Imidazole にdipicolylamine を連結した分子である。ルイス酸性の強いZn(II)の配位により、アシル転移反応の脱離基であるImidazoleの電子密度が低下することで、活性化し、蛋白質表面上の求核性アミノ酸残基と反応をする。C6細胞に対して一酸化窒素(NO)刺激を加えると、一時的に細胞内のZn(II)濃度が急激に上昇し、未知なvesicleに貯蔵される。AIZinラベル化剤をC6細胞に投与すると、NO刺激後に多数の蛋白質がラベル化された。ラベル化蛋白質を免疫沈降法によって精製し、トリプシンでpeptide断片化、LC-MS/MS解析を行った。その結果、未知なzinc-rich vesicleに存在する蛋白質を同定することができた。

The Zn (II) response includes the proteomics examination plan and the response test under the conditions of proteomics (II) and proteomics (II). Zn (II) has received information from both inside and outside the cell to show that it is instigated to have a war, and that the bureau is in the process of changing the situation. Zn (II) system is used to analyze the protein, protein and protein. The applicant and Zn (II) have completed the registration of the information provided by the applicant and the applicant (II), which is included in the application document. The new certificate "conditional customer license" is used. In the environment of high-temperature Zn (II) and organic chemistry, there are some chemical agents that can be selected for protein screening. After the cell was broken, the purified protein was analyzed by LC-MS/MS and the method was determined. The applicant

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

LDAI化学による内在性CAI2のmulti-color pulse chase imging

通过 LDAI 化学对内源性 CAI2 进行多色脉冲追踪成像

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
三木卓幸;藤島祥平;浜地格
通讯作者：
浜地格

LDAI化学による内在性膜蛋白質のケミカルラベル化とpulse chase解析

使用 LDAI 化学和脉冲追踪分析对完整膜蛋白进行化学标记

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
三木卓幸;藤島祥平;浜地格
通讯作者：
浜地格

A novel conditional protein labeling method(1):Zinc ion responsive focused proteome analysis in live cell

一种新型条件蛋白质标记方法(1)：活细胞中锌离子响应聚焦蛋白质组分析

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
三木　卓幸;阿波　諒;清中　茂樹;浜地　格
通讯作者：
浜地　格

LDAI化学による蛋白質ラベリング(1)膜蛋白質のpulse chase解析法への展開

使用LDAI化学进行蛋白质标记 (1) 膜蛋白脉冲追踪分析方法的开发

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
三木卓幸;藤島祥平;浜地格
通讯作者：
浜地格

Zn応答性ラベル化剤を用いたconditionalプロテオミクス

使用锌响应标记剂的条件蛋白质组学

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
三木卓幸;阿波諒;清中茂樹;浜地格
通讯作者：
浜地格

DOI：
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三木卓幸其他文献

Development of self-assembling peptide tag for intracellular reconstitution of protein assembly

开发用于细胞内蛋白质组装重建的自组装肽标签

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Miki Takayuki;Hashimoto Masahiro;Nakai Taichi;Mihara Hisakazu;三木卓幸;橋本　匡浩・三木卓幸・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;Takayuki Miki
通讯作者：
Takayuki Miki

細胞内で液-液相分離を作る設計ペプチドの開発

开发可在细胞内产生液-液相分离的工程肽

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hiroki Takahashi;Takayuki Miki;Masahiro Hashimoto and Hisakazu Mihara;Takayuki Miki;橋本　匡浩・三木卓幸・中井　太一・丹羽　達也・三原久和;三木卓幸・高橋　広樹・橋本　匡浩・梶原　圭悟・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸
通讯作者：
三木卓幸

ペプチドを基軸とした細胞内蛋白質の検出・操作技術の開発

基于肽的细胞内蛋白检测与操作技术的发展

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Miki Takayuki;Hashimoto Masahiro;Nakai Taichi;Mihara Hisakazu;三木卓幸;橋本　匡浩・三木卓幸・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;Takayuki Miki;三木卓幸;三木卓幸・橋本　匡浩・中井　太一・梶原　圭悟・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸・橋本　匡浩・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸
通讯作者：
三木卓幸

Design of self-assembling peptide tags for protein-based supramolecular construction in living cells

用于活细胞中基于蛋白质的超分子构建的自组装肽标签的设计

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Miki Takayuki;Hashimoto Masahiro;Nakai Taichi;Mihara Hisakazu;三木卓幸;橋本　匡浩・三木卓幸・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;Takayuki Miki;三木卓幸;三木卓幸・橋本　匡浩・中井　太一・梶原　圭悟・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸・橋本　匡浩・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸;Takayuki Miki・Masahiro Hashimoto・Hiroki Takahashi・Sae Nakayama・Hisakazu Mihara
通讯作者：
Takayuki Miki・Masahiro Hashimoto・Hiroki Takahashi・Sae Nakayama・Hisakazu Mihara

De novoペプチド間の自己集合と蛋白質間相互作用の協奏による細胞内での液滴形成

通过从头肽自组装和蛋白质-蛋白质相互作用形成细胞内液滴

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Miki Takayuki;Hashimoto Masahiro;Nakai Taichi;Mihara Hisakazu;三木卓幸;橋本　匡浩・三木卓幸・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;Takayuki Miki;三木卓幸;三木卓幸・橋本　匡浩・中井　太一・梶原　圭悟・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸・橋本　匡浩・高橋　広樹・中山　彩恵・三原久和;三木卓幸;Takayuki Miki・Masahiro Hashimoto・Hiroki Takahashi・Sae Nakayama・Hisakazu Mihara;Takayuki Miki;Takayuki Miki;中山　彩恵・三木卓幸・橋本　匡浩・高橋　広樹・梶原　圭悟・三原久和
通讯作者：
中山　彩恵・三木卓幸・橋本　匡浩・高橋　広樹・梶原　圭悟・三原久和