Mécanismes moléculaires et cellulaires de désensibilisation du récepteur opioïde delta

在大多数情况下，阿片受体δ（DOR）在体外可迅速失敏。通过该研究计划，我们将从总体上客观地了解DOR在体内的脱敏机制。Nous émettons l'hypothèse qu'en fonestrade de tumor（s）rôle（s），diverses populations de neurones réagissent différement à des stimulations répétées avec des agonistes sélectifs delta.目标1.δ激动剂耐受性神经元的分布。我们研究了脊髓束和脊神经节（DRG）细胞的分布，这些细胞的分布可导致Deltorphine对DOR刺激的反应性降低。我们提出的比较注射前或不注射Deltorphine的动物的建议：2.1 DOR的内在化特性是一种借助荧光选择性配体的体内内在化技术; 2.2通过Au [35 S] GTP γ S与G蛋白偶联; 2.3在测量ERK 1/2信号通路激活时的信号功能; puis les changements possibles dans les niveaux d'expression du récepteur（ARNm et protéine）à l'aide d'études d'hybridation in situ et de liaison.目标2. DOR的去敏感化隐含着机制。在体外，经激动剂刺激后，DOR C-末端部分的Ser 363主要是磷酰化的。在招募β-受体阻滞剂后，DOR预先排除了退化之路。在体内，如果没有抗痛觉过敏的耐受性，则DOR的调节可能与观察到的神经元群体（例如DRG与脊髓moelle epinière）的差异有关。我们的评价：1.1借助免疫印迹和免疫化学技术（抗磷酸DOR-Ser 363），检测到Ser 363上的磷酸化，特别是在隆贝尔细胞和DRG中的磷酸化，从而使DOR去敏感化; 1.2通过检测DOR的内化，检测到DOR的泛素化，从而使DOR去敏感化。

Comme c'est le cas pour la majorité des récepteurs couplés aux protéines G, in vitro le récepteur opioïde delta (DOR) est rapidement désensibilisé suite à son activation. Avec ce programme de recherche, nous avons comme objectif général d'élucider les mécanismes de désensibilisation de DOR in vivo. Nous émettons l'hypothèse qu'en fonction de leur(s) rôle(s), diverses populations de neurones réagissent différemment à des stimulations répétées avec des agonistes sélectifs delta. Objectif 1. Distribution des neurones développant une tolérance aux agonistes delta. Nous étudierons la distribution des cellules de la moelle épinière et des ganglions spinaux (DRG) qui développent une diminution de responsivité à la deltorphine suite à des stimulations répétées de DOR. Nous proposons donc de comparer chez des animaux pré-injectés ou non avec la deltorphine : 2.1 les propriétés d'internalisation de DOR à l'aide d'une technique d'internalisation in vivo d'un ligand fluorescent sélectif; 2.2 son couplage aux protéines G par liaison au [35S]GTPgammaS; 2.3 ses fonctions signalétiques en mesurant l'activation de la voie de signalisation ERK1/2; puis les changements possibles dans les niveaux d'expression du récepteur (ARNm et protéine) à l'aide d'études d'hybridation in situ et de liaison. Objectif 2. Mécanismes impliqués dans la désensibilisation de DOR. In vitro, après stimulation par un agoniste, le résidu Ser363 dans la portion C-terminale de DOR est le premier résidu à être phosphorylé. Après le recrutement des beta-arrestines, DOR emprunte presque exclusivement la voie de dégradation. In vivo, vu l'absence de tolérance antihyperalgésique, il est possible que la régulation de DOR se fasse de façon différentielle selon les populations de neurones observées (e.g. DRG versus moelle épinière). Nous évaluerons : 1.1 les niveaux de désensibilisation de DOR en mesurant la phosphorylation sur le résidu Ser363, en particulier dans la moelle lombaire et dans les DRG, à l'aide des techniques d'immunoblot et d'immunohistochimie (anti-phosphoDOR-Ser363); 1.2 les voies qu'emprunte DOR après son internalisation; puis 1.3 les niveaux de récepteurs destinés à la dégradation en mesurant l'ubiquitinylation de DOR.