Mécanismes moléculaires et cellulaires de désensibilisation du récepteur opioïde delta

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Comme c'est le cas pour la majorité des récepteurs couplés aux protéines G, in vitro le récepteur opioïde delta (DOR) est rapidement désensibilisé suite à son activation. Avec ce programme de recherche, nous avons comme objectif général d'élucider les mécanismes de désensibilisation de DOR in vivo. Nous émettons l'hypothèse qu'en fonction de leur(s) rôle(s), diverses populations de neurones réagissent différemment à des stimulations répétées avec des agonistes sélectifs delta. Objectif 1. Distribution des neurones développant une tolérance aux agonistes delta. Nous étudierons la distribution des cellules de la moelle épinière et des ganglions spinaux (DRG) qui développent une diminution de responsivité à la deltorphine suite à des stimulations répétées de DOR. Nous proposons donc de comparer chez des animaux pré-injectés ou non avec la deltorphine : 2.1 les propriétés d'internalisation de DOR à l'aide d'une technique d'internalisation in vivo d'un ligand fluorescent sélectif; 2.2 son couplage aux protéines G par liaison au [35S]GTPgammaS; 2.3 ses fonctions signalétiques en mesurant l'activation de la voie de signalisation ERK1/2; puis les changements possibles dans les niveaux d'expression du récepteur (ARNm et protéine) à l'aide d'études d'hybridation in situ et de liaison. Objectif 2. Mécanismes impliqués dans la désensibilisation de DOR. In vitro, après stimulation par un agoniste, le résidu Ser363 dans la portion C-terminale de DOR est le premier résidu à être phosphorylé. Après le recrutement des beta-arrestines, DOR emprunte presque exclusivement la voie de dégradation. In vivo, vu l'absence de tolérance antihyperalgésique, il est possible que la régulation de DOR se fasse de façon différentielle selon les populations de neurones observées (e.g. DRG versus moelle épinière). Nous évaluerons : 1.1 les niveaux de désensibilisation de DOR en mesurant la phosphorylation sur le résidu Ser363, en particulier dans la moelle lombaire et dans les DRG, à l'aide des techniques d'immunoblot et d'immunohistochimie (anti-phosphoDOR-Ser363); 1.2 les voies qu'emprunte DOR après son internalisation; puis 1.3 les niveaux de récepteurs destinés à la dégradation en mesurant l'ubiquitinylation de DOR.