Molekulargenetische Charakterisierung des Eisen-Phytosiderophor-Transports in Gramineen

Fe（Ⅲ）与禾本科植物铁载体（PS）的结合，使Fe（Ⅲ）-PS成为禾本科植物体内的一种转运蛋白。本研究的目的是研究Maiswurzeln等离子体中Fe-PS-转运的基因和分子特征。在Fe-PS的基础上，由于第一代转座子标签的存在，使得Maismutante ys 1在Fe-PS的基础上出现了缺陷。在此过程中，通过一个转座子激活的Maislinie（Mutator）“gescreent”，可以从一个ys 1的Kreuzung中获得Nachkommen。一个Pflanze，一个变形的物理模型，被选择和选择。通过对YS 1中的Mu-转座子插入和xs 1-侧翼的RFLP-Markern进行Rückkreuzungen和Kopplungsanalysis，可以鉴定出Mu-转座子，并对YS 1-Gen进行韦尔登。通过韦尔登获得的平行光吸收系数，也可以通过铁-Düngung获得韦尔登。在野生型和突变体中的YS基因只有一种功能，这是韦尔登的结果。Alternativ dazu soll versucht韦尔登，铁-PSTransporter über Hefekomplementation zu isolieren。在PS bzw中，通过一个cDNA-Expressionsbank transformiert和一个N-Mangel-Medium ausplattiert韦尔登，可以使Hefestämme sollen。Fe-komplexierte PS als einzige Stickstoff-Quelle verfügbar sind.在Hefe和Xenopus卵母细胞中表达的基因和转运蛋白可用于韦尔登分析。

Zur Aneignung von Eisen (Fe) geben Gramineen Phytosiderophore (PS) ab und nehmen Fe(III)-PS über ein postuliertes Transportprotein in der Wurzelmembran auf. Ziel des Projekts sind die Isolierung der Gene und die molekulare Charakterisierung des Fe-PS-Transports an der Plasmamembran von Maiswurzeln. Da die Gelbstreifigkeit der Maismutante ys1 auf einem Defekt in der Aufnahme von Fe-PS beruht, soll das ys1-Gen über TransposonTagging isoliert werden. In Vorversuchen wurden Nachkommen aus einer Kreuzung von ys1 mit einer Transposon-aktiven Maislinie (Mutator) "gescreent". Eine Pflanze, die den Phänotyp der ys1Mutante zeigte, wurde selektiert und geselbstet. Über Rückkreuzungen und Kopplungsanalyse zwischen Mu-Transposon-Insertionen und xs1-flankierenden RFLP-Markern soll das in YS1 inserierte Mu-Transposon identifiziert und das YS1-Gen sequenziert werden. Parallel soll der gleiche Ansatz mit der ys3-Mutante durchgeführt werden, deren gelbstreifiger Phänotyp auch durch Fe-Düngung behoben werden kann. Für einen Funktionsnachweis sollen die YS-Gene in Wildtyp-Mais und in den ys-Mutanten überexprimiert werden. Alternativ dazu soll versucht werden, Fe-PSTransporter über Hefekomplementation zu isolieren. Ausgewählte Hefestämme sollen mit einer cDNA-Expressionsbank transformiert und auf N-Mangel-Medium ausplattiert werden, in dem PS bzw. Fe-komplexierte PS als einzige Stickstoff-Quelle verfügbar sind. Gene aus beiden Ansätzen sollen in Hefe und Xenopus-Oocyten exprimiert und die Transporteigenschaften ihrer Proteine analysiert werden.