Energie-dispersive Röntgenmikroanalyse (EDX) der Calcium-Dynamik bei Paramecium tetraurelia Zellen

Ca，evtl.的定量EDX分析。在Austausch mit Sr中，采用定量方法（Hardt und Plattner，eingereicht，a，B; Anlage），在Sub-Sekundenbereich中对我们的中间淬火流和Gefriersubstitution（unter Me 2 + Retentionsbedingungen）进行了动力学分析。Nun sollen folgende basale zellbiologische Aspekte am Modell der Paramecium-Zelle untersucht韦尔登：（i）Ganz-Zell钙标测在多胺（AED）刺激下同步胞吐（80 ms）和胞吞（350 ms），（ii）在双相电刺激下从质膜下钙标测的钙分布（Coffein > AED）für einen direkten in situ-Test eines 'store-operated Ca2+-Influx'，（iii）Wiederfüllung der Speicher nach der Vorgabe in（ii），（iv）Ca-Dynamik bei Depolarisations-induzierter Cilien-Schlagumkehr via Ca2+-Influx über spannungsabhängige Ca-Kanäle der Cilienmembran und die Reetablierung der Ca-Homöostase（offene Frage nach Verteilung von Ca-Kanälen und Ca-Pumpe in Cilien）. - Für（i-iii）steht die Ca2+-Influx-defekte，nicht AED-reaktive Mutante nd6，für（iv）die Mutante d4-500r（ohne ciliäre Ca-Kanäle）bzw.也会变成双胞胎。注：EDX测定了Ca，[Ca]，bzw。der Ca-Fluxe als Voraussetzung für lokale Regulation der freien ionalen Ca2+-Konzentration，[Ca2+].

Die quantitative EDX-Analyse von Ca, evtl. im Austausch mit Sr, während dynamischer zellulärer Prozesse im Sub-Sekundenbereich wurde von uns mittels Quenched-flow und Gefriersubstitution (unter Me2+ Retentionsbedingungen) als quantitative Methode etabliert (Hardt und Plattner, eingereicht, a, b; Anlage). Nun sollen folgende basale zellbiologische Aspekte am Modell der Paramecium-Zelle untersucht werden: (i) Ganz-Zell Ca-Mapping während synchroner Exocytose (80 ms) und Endocytose (350 ms) auf Polyamin- (AED-) Stimulation hin, (ii) Verlauf der Ca-Entleerung aus subplasmalemmalen Ca-Speichern bei Doppeltriggerung (Coffein > AED) für einen direkten in situ-Test eines 'store-operated Ca2+-Influx', (iii) Wiederfüllung der Speicher nach der Vorgabe in (ii), (iv) Ca-Dynamik bei Depolarisations-induzierter Cilien-Schlagumkehr via Ca2+-Influx über spannungsabhängige Ca-Kanäle der Cilienmembran und die Reetablierung der Ca-Homöostase (offene Frage nach Verteilung von Ca-Kanälen und Ca-Pumpe in Cilien). - Für (i-iii) steht die Ca2+-Influx-defekte, nicht AED-reaktive Mutante nd6, für (iv) die Mutante d4-500r (ohne ciliäre Ca-Kanäle) bzw. es stehen auch Doppelmutanten zur Verfügung. NB: EDX erlaubt die Messung des gesamten Ca, [Ca], bzw. der Ca-Fluxe als Voraussetzung für lokale Regulation der freien ionalen Ca2+-Konzentration, [Ca2+].