Mécanisme d'action d'ASPRV1 dans l'inflammation

Mon program vise à clarifier le fonctionnement du neutrophile，une cellule capitale pour l'immunité.通过Au CRSNG，我的实验室解密了转录组，这是我们鉴定ASPRV 1蛋白的一个管道，就像一个新的中性粒细胞特异性标记Au一样。一个学生发现ASPRV 1在一个依赖于哺乳动物的模型动物中表现出炎症。但是ASPRV 1的作用机制还不清楚。Notre objectif général est maintenant d'élucider ce mécanisme en testant une hypothèse inédite et excitante：ASPRV 1 serait sécrétée par une sous-population de prophyles activés et cliverait un substrat impliqué dans la response aux prophylacs，possiblement un facteur en lien avec le système du complément or Au moins ayant une activité pro-inflammatoire. Nos objectifs specifiques sont les suivants：1）Déterminer dans quels compartments se trouve ASPRV 1（ex.细胞器，细胞外环境），以及如果sécrétion est déclenchée par des complex immuns，des molécules du complément et autres stimulaire（例如，细菌剂、细胞因子）;为了做到这一点，我们对活体外的微生物进行了检查，这是一种先进的显微镜超分辨率技术的辅助手段; 2）与ASPRV 1相比，ASPRV 1在免疫复合物的一种研究模式中的贡献更好，更好（阿尔萨斯被动反应），再验证其他模式下的结果加上隐含的复合体，就像通过依赖于B细胞的抗原进行免疫接种而导致的脑炎，以及通过蜱虫分泌物导致的哮喘; 3）利用单细胞RNA测序技术，通过比较嗜热链球菌Asprv 1-/-和Asprv 1 +/+，确定嗜热链球菌ASPRV 1的亚型，验证ASPRV 1对嗜热链球菌ASPRV 1亚型的影响; 4）通过比较嗜中性粒细胞和生物液体（来源于Asprv 1-/-）的分泌物，识别出对炎症有贡献的ASPRV 1底物，这些底物在使用N-末端枯草杆菌酶的蛋白质组学技术时存在于或不存在于外源ASPRV 1;这些结果在多种炎症模型中得到证实。该方案具有独创性和前瞻性，其中包括：1）了解免疫系统中蛋白作用机制的基础知识，因为蛋白作用机制是不可抗力的解释，因此可以评论中性粒细胞对慢性炎症的贡献; 2）des knaissances applicables qui acquisition le brevet international #16100-003-PCT sur ASPRV 1 avec ses possibles retombées socio-economiques; 3）du personnel hautement qualifié sur des technologies de pointes（ex. microscopie STED，scRNAseq，N-terminomique）; et 4）de précieux outils（ex. données scRNAseq，pipelines bio-informatiques）qui seront mis à la disposition de la communauté pour de futures études.

Mon programme vise à clarifier le fonctionnement du neutrophile, une cellule capitale pour l'immunité. Grâce au CRSNG, mon laboratoire a décrypté son transcriptome, ce qui nous a conduit à identifier la protéase ASPRV1 comme un nouveau marqueur spécifique du neutrophile. L'un de mes étudiants a découvert qu'ASPRV1 perpétue l'inflammation dans un modèle animal dépendant des anticorps. Cependant, le mécanisme d'action d'ASPRV1 reste inconnu. Notre objectif général est maintenant d'élucider ce mécanisme en testant une hypothèse inédite et excitante: ASPRV1 serait sécrétée par une sous-population de neutrophiles activés et cliverait un substrat impliqué dans la réponse aux anticorps, possiblement un facteur en lien avec le système du complément ou au moins ayant une activité pro-inflammatoire. Nos objectifs spécifiques sont les suivants: 1) Déterminer dans quels compartiments se trouve ASPRV1 (ex. organelles, milieu extracellulaire) et si sa sécrétion est déclenchée par des complexes immuns, des molécules du complément et autres stimuli (ex. agents bactériens, cytokines); pour ce faire, nous examinerons des neutrophiles ex vivo, en outre à l'aide d'une technique avant-gardiste de microscopie super-résolution; 2) Démontrer qu'ASPRV1 contribue bel et bien à la réponse aux anticorps en comparant des souris exprimant ou pas ASPRV1 dans un modèle réductionniste induit par des complexes immuns (réaction d'Arthus passive), puis valider les résultats dans d'autres modèles plus complexes impliquant les anticorps, comme une encéphalite induite par immunisation avec un antigène dépendant des cellules B et l'asthme induit avec des extraits d'acariens; 3) Déterminer le sous-type de neutrophiles exprimant ASPRV1 et vérifier si leur phénotype est affecté par ASPRV1 en comparant des neutrophiles de souris Asprv1-/- et Asprv1+/+ à l'aide de la technique de single cell-RNA sequencing; 4) Identifier les substrats d'ASPRV1 qui contribuent à l'inflammation en comparant des extraits de neutrophiles et des liquides biologiques (de souris Asprv1-/-) qui seront traités ou non avec de l'ASPRV1 exogène en utilisant des techniques protéomiques telle que la N-terminomique subtiligase; les résultats seront confirmés dans divers modèles inflammatoires. Ce programme est original et fort prometteur, car il fournira: 1) des connaissances fondamentales sur le mécanisme d'action d'une protéine qui était inconnue dans le système immunitaire jusqu'à récemment et qui pourrait fournir une explication majeure, soit comment le neutrophile contribue à l'inflammation chronique; 2) des connaissances applicables qui supporteront le brevet international #16100-003-PCT sur ASPRV1 avec ses possibles retombées socio-économiques; 3) du personnel hautement qualifié sur des technologies de pointes (ex. microscopie STED, scRNAseq, N-terminomique); et 4) de précieux outils (ex. données scRNAseq, pipelines bio-informatiques) qui seront mis à la disposition de la communauté pour de futures études.