Funktionelle Interaktionen von junctional adhesion molecule-A (JAM-A) bei Leukozytenrekrutierung und Atherosklerose

连接粘附分子-A (JAM-A) 在白细胞募集和动脉粥样硬化中的功能相互作用

• 批准号: 23773519
• 负责人: Professor Dr. Christian Weber
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Prophylaxe und Epidemiologie der Kreislaufkrankheiten
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/23773519?language=en
• 关键词: Funktionelle; Interaktionen; von; junctional; adhesion

Junctional adhesion molecule-A (JAM-A) ist Mitglied der Immunglobulin-Superfamilie (IgSF) und an interzellulären Kontakten des Endothels im apikalen Bereich der tight junctions exprimiert. Hier geht es via der N-terminalen Domäne homophile Bindungen mit JAM-A auf Nachbarzellen ein und stellt über zytoplasmatische Wechselwirkungen mit PDZ Proteinen Verankerungen mit dem Aktin-Zytoskelett her. So kontrolliert JAM-A die endotheliale Permeabilität, wird aber bei entzündlicher Stimulation auf die Zelloberfläche umverteilt. Vorarbeiten haben die heterophile Interaktion von JAM-A (via der membran-proximalen Domäne) und leukozytärem ¿Lß2 Integrin (LFA-1) etabliert, sowie deren Beteiligung von Adhäsion und Transmigration von Lymphozyten. Im vorliegenden Antrag wird die exakte Lokalisierung relevanter Strukturbereiche und Bindungsepitope von LFA-1 ¿Lß2 und JAM-A für deren heterophile Interaktion, sowie die Ermittlung kinetischer Bindungsdaten angestrebt. Dies erfolgt durch Verwendung aufgereinigter (bzw. domänen-deletierter) JAM-A.lg Fusionsproteine und der offenen, d.h. hochaffinen LFA-1I Domäne in solid-phase Bindungsexperimenten und der Plasmonresonanz. Die Beteiligung Metallionen-bindender, saurer Aminosäuren und N-Glykosylierungssteilen wird über gezielte Punktmutagenese getestet. Die Bedeutung einer lateralen Interaktion von LFA-1 und leukozytärem JAM-A in eis wird mittels RNA Interferenz, Koimmunopräzipitation und Fluoreszenz- Resonanz-Energietransfer bei Substratkontakt bzw. Transmigration ermittelt. Durch live Videomikroskopie wird die Rolle einer lateralen Interaktion von JAM-A und LFA-1 in der transendothelialen Migration von Leukozyten unter Flußbedinungen überprüft. Die Beteiligung von JAM-A an Plaquebildung und -infiltration wird in Modellen der nativen Atherogenese mit Hitfe von apoE-/- Mäusen mit kompletter oder endothel-spezifischer JAM-A Deletion bzw. JAM-A-/- Knochenmarks-transplantierten apoE-/- Mäusen und durch Antikörperblockade in vivo untersucht. Schließlich wird getestet, ob JAM-A in löslicher Form im Blut zirkuliert und so als kardiovaskulärer Risikomarker etabliert werden kann. So lassen sich Erkenntnisse gewinnen zu strukturellen Voraussetzungen und zur funktionellen Rolle von JAM-A Interaktionen erwarten.

连接粘附分子-A（Junctional adhesion molecule-A，JAM-A）是免疫球蛋白超家族（Immunoglobulin-Superfamilie，IgSF）的成员，是紧密连接的内皮细胞间的一种连接。在此，通过N-末端同源性结合物与JAM-A结合，并通过PDZ蛋白与Aktin-Zytoplastin结合，控制JAM-A的内皮渗透性，将有助于对Zelloberfläche的刺激。结论：JAM-A与LFA-1之间存在亲异嗜性的相互作用，从而影响了细胞的粘附和迁移。在此之前，Antrag将对LFA-1和JAM-A的结构和结合位点进行精确的定位，以进行异嗜性相互作用，从而使动力学结合数据的确定性变得令人担忧。Dies erfolgt durch Verwendung aufgereinigter（bzw. JAM-A.lg Fusionsproteine und der offenen，d.h. Hochaffinen LFA-1I Domäne in solid phase Bindungsexperimenten und der Plasmonresonanz.金属结合剂、氨基结合剂和N-糖基结合剂将被检测到。LFA-1和leukozytärem JAM-A的侧向相互作用将在Substratkontakt bzw中实现RNA干扰、免疫纯化和荧光共振能量转移。迁移完成。通过实时视频，我们可以了解JAM-A和LFA-1在经内皮细胞迁移的流动性下的作用。在载脂蛋白E-/- Mäusen基因转染的天然动脉粥样硬化模型中，JAM-A与斑块形成和浸润的关系可通过复合物或内皮特异性JAM-A缺失来实现。JAM-A-/- Knochenmarks-transplantierten apoE-/- Mäusen und durch Antikörperblockade in vivo untersucht. Schließlich wird getestet，ob JAM-A in löslicher Form im Blut housekuliert and so als kardiovaskulärer Risikomarker etabliert韦尔登kann.因此，JAM-A Interaktionen的结构和功能作用使其成为可能。