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腸管上皮組織におけるミクロオートファジーの生理機能及び分子機序

肠上皮组织微自噬的生理功能及分子机制

基本信息

批准号：
21K06553
负责人：
和田戈虹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Doshisha Women's College of Liberal Arts
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

初期胚組織VEでのミクロオートファジーには低分子量GTPase Rab7 の機能が必須であった（Kawamura et al. Nat Commun 2012）。そこで、小腸上皮系細胞でのミクロオートファジーにおけるRab7、ならびにRab7のeffector分子であるmVam2の必要性を検討する。申請者はCre recombinase依存の組換えによってmVam2、rab7遺伝子が破壊できる条件的遺伝子破壊アリル(mVam2flox、rab7flox)を作出している。小腸上皮細胞特異的にCre recombinaseを発現するVillin-Creマウスを交配することで、小腸上皮細胞特異的Rab7、mVam2コンディショナル・ノックアウト(cKO)マウスを作製することが可能である。今年度、これらのコンディショナル・ノックアウト(cKO)マウスが樹立され、さらに、Rab7、mVam2両遺伝子のダブル欠損マウスの作製に成功している。現在これらの欠損マウスを用いて、小腸上皮細胞の形態、空腸、回腸での蛍光デキストランの取り込み、エンドソーム・リソソーム間の小胞輸送のマーカータンパク質の局在などについて、野生型と比較に表現型を詳細に解析を進めている。また、野生型とcKOの新生児の体重増加を測定すると同時に、血清中成分の量を測定し、腸管を介した栄養吸収の効率を比較する。さらに、in vitroの実験系を用いて液胞型ATPase阻害剤、タンパク質分解酵素阻害剤、脂質分解阻害剤、イノシトールリン脂質の変換阻害剤等を用いて、小腸上皮細胞の取り込みのメカニズムを解析中である。

The function of the initial embryonic tissue VEで <e:1> ロロロ <s:1> トファジににに low-molecular-weight GTPase Rab7 に function が must であった (Kawamura et al. Nat Commun 2012). そこで, small intestinal epithelial cells でのミクロオートファジーにおける Rab7, ならびに Rab7 の effector molecules である mVam2 の necessity を beg す検る. Applicants は Cre recombinase dependent の group in えによって mVam2, rab7 but 伝が broken 壊できる conditions could 伝 son broken 壊アリル (mVam2flox, rab7flox) を make している. Small intestinal epithelial cells specific に Cre recombinase を発 now する Villin - Cre マウスを mating することで, small intestinal epithelial cells specific Rab7, mVam2 コンディショナル · ノックアウト (cKO) マウスを cropping することが may である. This year, これらのコンディショナル · ノックアウト (cKO) マウスが set され, さらに, Rab7, mVam2 struck heritage 伝 son のダブル owe loss マウスの cropping に successful している. Now これらの owe loss マウスを with いのて, intestinal epithelial cell morphology, jejunum, ileum での蛍 light デキストランの take り込み, エンドソーム · リソソームの between vesicular transport のマーカータンパク qualitative の bureau in などについて, wild type と compare に phenotype を detailed analytical をに into めている. また, wild type と cKO の where new の weight raised を requirement by measuring するとに at the same time, determination of serum components の quantity をし, insufflate を dielectric した tech students.their ownship keep sucking 収のを sharper rate comparison する. さらに, the in vitro の be を験 department with いて vacuole type ATPase resistance against tonic, タンパク qualitative decomposition enzyme inhibitor against tonic, lipid decomposition resistance against tonic, イノシトールリン lipid の variations in resistance against tonic いを in て, small intestinal epithelial cells のり込みのメカニズムを parsing である.