腸管上皮組織におけるミクロオートファジーの生理機能及び分子機序

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初期胚組織VEでのミクロオートファジーには低分子量GTPase Rab7 の機能が必須であった（Kawamura et al. Nat Commun 2012）。そこで、小腸上皮系細胞でのミクロオートファジーにおけるRab7、ならびにRab7のeffector分子であるmVam2の必要性を検討する。申請者はCre recombinase依存の組換えによってmVam2、rab7遺伝子が破壊できる条件的遺伝子破壊アリル(mVam2flox、rab7flox)を作出している。小腸上皮細胞特異的にCre recombinaseを発現するVillin-Creマウスを交配することで、小腸上皮細胞特異的Rab7、mVam2コンディショナル・ノックアウト(cKO)マウスを作製することが可能である。今年度、これらのコンディショナル・ノックアウト(cKO)マウスが樹立され、さらに、Rab7、mVam2両遺伝子のダブル欠損マウスの作製に成功している。現在これらの欠損マウスを用いて、小腸上皮細胞の形態、空腸、回腸での蛍光デキストランの取り込み、エンドソーム・リソソーム間の小胞輸送のマーカータンパク質の局在などについて、野生型と比較に表現型を詳細に解析を進めている。また、野生型とcKOの新生児の体重増加を測定すると同時に、血清中成分の量を測定し、腸管を介した栄養吸収の効率を比較する。さらに、in vitroの実験系を用いて液胞型ATPase阻害剤、タンパク質分解酵素阻害剤、脂質分解阻害剤、イノシトールリン脂質の変換阻害剤等を用いて、小腸上皮細胞の取り込みのメカニズムを解析中である。