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腸管上皮組織におけるミクロオートファジーの生理機能及び分子機序

肠上皮组织微自噬的生理功能及分子机制

基本信息

批准号：
21K06553
负责人：
和田戈虹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Doshisha Women's College of Liberal Arts
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

初期胚組織VEでのミクロオートファジーには低分子量GTPase Rab7 の機能が必須であった（Kawamura et al. Nat Commun 2012）。そこで、小腸上皮系細胞でのミクロオートファジーにおけるRab7、ならびにRab7のeffector分子であるmVam2の必要性を検討する。申請者はCre recombinase依存の組換えによってmVam2、rab7遺伝子が破壊できる条件的遺伝子破壊アリル(mVam2flox、rab7flox)を作出している。小腸上皮細胞特異的にCre recombinaseを発現するVillin-Creマウスを交配することで、小腸上皮細胞特異的Rab7、mVam2コンディショナル・ノックアウト(cKO)マウスを作製することが可能である。今年度、これらのコンディショナル・ノックアウト(cKO)マウスが樹立され、さらに、Rab7、mVam2両遺伝子のダブル欠損マウスの作製に成功している。現在これらの欠損マウスを用いて、小腸上皮細胞の形態、空腸、回腸での蛍光デキストランの取り込み、エンドソーム・リソソーム間の小胞輸送のマーカータンパク質の局在などについて、野生型と比較に表現型を詳細に解析を進めている。また、野生型とcKOの新生児の体重増加を測定すると同時に、血清中成分の量を測定し、腸管を介した栄養吸収の効率を比較する。さらに、in vitroの実験系を用いて液胞型ATPase阻害剤、タンパク質分解酵素阻害剤、脂質分解阻害剤、イノシトールリン脂質の変換阻害剤等を用いて、小腸上皮細胞の取り込みのメカニズムを解析中である。

Early embryonic tissues are essential for the function of low molecular weight GTase Rab7 (Kawamura et al. Nat Commun 2012). To explore the necessity of Rab7, Rab7 effector molecules in the development of small intestine epithelial cells. The applicant shall make a request for a Cre recombination dependent component (mVam 2 flox, rab7flox). Small intestinal epithelial cell-specific Cre recombinase is produced by Villin-Cre recombinase, and small intestinal epithelial cell-specific Rab7, mVam2 are produced by Cre recombinase (cKO). This year, the production of this product was successfully completed. Now, we have a detailed analysis of the phenotype of intestinal epithelial cell morphology, jejunum, ileum, ileum, jejunum, ileum, ileum, jejunum, ileum, ileum, The increase in neonatal weight of wild type and cKO was measured simultaneously with the determination of serum components and the comparison of intestinal tract intake rates. In addition, in vitro, the application of inhibitors of intracellular ATPase, enzyme inhibitors, lipid decomposition inhibitors, lipid conversion inhibitors, etc., and the analysis of intestinal epithelial cells in vitro are discussed.