プロテオーム解析に基づく抗血小板薬の薬効指標の確立および薬動力学解析

基于蛋白质组分析的抗血小板药物疗效指标建立及药效分析

• 批准号: 21K06709
• 负责人: 山本 康次郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06709/
• 关键词: 血小板; 抗血小板薬; Talin; 血液凝固; プロテオーム解析

本研究では、血小板凝集能を変化させた多血小板血漿をADP刺激した後のプロテオーム解析を行い、血小板凝集能を定量的に反映するタンパク質を探索する。保存検体でも安定に存在する指標タンパクを見出すことにより、臨床現場において血小板凝集能を容易に評価できるようになる。また、抗血小板薬の薬動力学解析が可能になり、合理的な薬物投与設計が可能になる。血小板凝集カスケードの最下流では、CalpainによってTalinが切断され、生成したTalin-HeadがIntegrinαⅡbβ3に結合し、IntegrinαⅡbβ3の活性化が起こる。したがって、Talin-Headの生成量を分析することで、血小板凝集能を評価できる。まず、健常人から得た新鮮血液を用いて、遠心分離によりPRPを調製し、ADP添加により血小板を活性化した直後に還元アルキル化処理し、トリプシンで蛋白質を断片化し、Talin-Headに特異的なアミノ酸配列を検出できるLC-TOF MS条件を検討した。STVLQQQYNRに相当するMSシグナルを特異的なアミノ酸配列として選択できた。そして、合成ペプチドを用いてMSによる測定の条件を検討したところ、必要な濃度範囲で直線性が得られ、測定可能であることがわかった。また、その測定結果はウエスタンブロッティングによる測定と矛盾せず、ヒト検体を用いた検討が可能であることが示された。薬物による影響を検討するには動物実験が適当であり、ラットにおけるTalin特異的配列を同定した。測定条件の検討をほぼ完了し、ヒトと同様の手法で測定可能となる見込みである。現時点で特に問題は生じていない。

In this study, platelet agglutination can reflect the quantity of platelet agglutination. After ADP stimulation, platelet agglutination can be quantitatively reflected. In order to save the body, it is necessary to make sure that it is easy to treat platelet agglutination. The kinetic analysis of antiplatelet and antiplatelet antithrombotic drugs may be sensitive, and reasonable drug delivery and design may be sensitive. Thrombocytopenia, Calpain, Talin, Integrin α Ⅱ b β 3 binding and Integrin α Ⅱ b β 3 activation were detected. Platelet aggregation, Talin-Head production, platelet aggregation and platelet aggregation were analyzed. For healthy and healthy people, new blood samples were used, heart separation was performed, PRP was activated, ADP was added, platelet was activated, protein was fragmented, Talin-Head was fragmented, and LC-TOF MS conditions were determined. STVLQQQYNR is equivalent to the number of acid in the MS. The conditions are measured with the MS instrument, the necessary temperature range is the highest, and the measurement is possible. The results of the test results show that there is a contradiction in the determination of the contradiction, and that the system may show that the contradiction is not correct. The arrangement of the Talin special item is the same as that of the special device. The test condition is finished, and it is possible that the test may be done. Special questions at some point in time will cause a lot of trouble.