癌促進型分岐点の制御に着目した新規食道癌治療の分子基盤

(1) TIA1遺伝子のスプライシングを制御する因子の同定これまで癌の発生や進展に関与すると報告のあるスプライシング制御因子をリスト化し、siRNAを用いて各々をノックダウンした細胞でTIA1aとTIA1bの発現量をqPCRおよびウェスタンブロット法を用いて検討した。この結果、TIA1a型スプライシングを促進する蛋白質XとTIA1b型スプライシングを促進する蛋白質Yを同定した。また、TIA1遺伝子のexon 5領域を含むミニジーンで検討した結果、蛋白質Xノックダウン細胞でTIA1a型スプライシングが、蛋白質Yノックダウン細胞でTIA1b型スプライシングが確認された。さらに、蛋白質X特異的抗体を用いて免疫沈降した結果、TIA1 pre-mRNAとの結合が確認された。このことから、蛋白質XがTIA1遺伝子の癌促進型スプライシングを制御する因子であると考えられる。（2） スプライシング制御因子の発現変動が癌細胞の悪性形質化に与える影響に関する検討蛋白質Xまたは蛋白質Yノックダウン細胞を用いて検討を行った。蛋白質Xノックダウン細胞では細胞増殖が有意に抑制され、アポトーシスの亢進が確認された。また、スフェロイド形成も有意に抑制された。一方、蛋白質Yノックダウン細胞は予想に反して細胞増殖能の亢進が認められず、やや抑制される傾向が見られた。今後、遊走能や浸潤能について創傷治癒アッセイやボイデンチャンバー法を用いて検討する予定にしている。以上の結果から、蛋白質XはTIA1遺伝子のスプライシングを癌促進型にスイッチし、TIA1a優位の発現とすることで癌の進展を促進する可能性が示唆された。また、蛋白質XがTIA1aの細胞内機能に対する特異的な介入点の一つであると考えている。

(1) TIA1遺伝子のスプライシングを制御する因子の同定これまで癌の発生や進展に関与すると報告のあるスプライシング制御因子をリスト化し、siRNAを用いて各々をノックダウンした細胞でTIA1aとTIA1bの発現量をqPCRおよびウェスタンブロット法を用いて検討した。この結果、TIA1a型スプライシングを促進する蛋白質XとTIA1b型スプライシングを促進する蛋白質Yを同定した。また、TIA1遺伝子のexon 5領域を含むミニジーンで検討した結果、蛋白質Xノックダウン細胞でTIA1a型スプライシングが、蛋白質Yノックダウン細胞でTIA1b型スプライシングが確認された。さらに、蛋白質X特異的抗体を用いて免疫沈降した結果、TIA1 pre-mRNAとの結合が確認された。このことから、蛋白質XがTIA1遺伝子の癌促進型スプライシングを制御する因子であると考えられる。（2） スプライシング制御因子の発現変動が癌細胞の悪性形質化に与える影響に関する検討蛋白質Xまたは蛋白質Yノックダウン細胞を用いて検討を行った。蛋白質Xノックダウン細胞では細胞増殖が有意に抑制され、アポトーシスの亢進が確認された。また、スフェロイド形成も有意に抑制された。一方、蛋白質Yノックダウン細胞は予想に反して細胞増殖能の亢進が認められず、やや抑制される傾向が見られた。今後、遊走能や浸潤能について創傷治癒アッセイやボイデンチャンバー法を用いて検討する予定にしている。以上の結果から、蛋白質XはTIA1遺伝子のスプライシングを癌促進型にスイッチし、TIA1a優位の発現とすることで癌の進展を促進する可能性が示唆された。また、蛋白質XがTIA1aの細胞内機能に対する特異的な介入点の一つであると考えている。