核移行シグナル化学修飾遺伝子による非ウイルスベクターの高効率化

利用核输出信号化学修饰基因提高非病毒载体的效率

• 批准号: 14030080
• 负责人: 長崎 健
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030080/
• 关键词: トランスフェクション; 遺伝子デリバリー; 核移行シグナル; プラスミド; コンジュゲート; 非ウイルスベクター; 核輸送タンパク

非ウイルスベクターの効率向上は非常に重要な問題である。この問題解決法の一つに外部遺伝子の核移行促進が上げられる。核移行シグナル(NLS)は外来性タンパクやプローブを能動的に核内へ輸送することが知られている。これまでのNLSを利用したトランスフェクション効率向上研究の問題点として1.共有結合方式により正常な転写ができないこと2.スペーサーの鎖長が短いことからNLSがDNAに埋没してしまうことの2点があげられる。そこで、本研究では鎖長の長いPEGスペーサーを用い、ジアゾカップリング修飾することで導入数を制御するなど欠点改良し、トランスフェクション高効率化を目指して研究を行った。NLSとプラスミドDNAがPEGスペーサーを介し共有結合しているコンジュゲート体の合成を行い、NLSプラスミドコンジュゲート体がインポーチンα、インポーチンβとの複合体形成を促進していることが分かった。また、トランスフェクションの結果から、未修飾のプラスミドと比較してNLS-プラスミドの発現効率が高いという結果が得られた。しかし、細胞質へのマイクロインジェクションの結果からはNLS-プラスミドは細胞質のみで観察され、NLS-プラスミドの核移行促進効果は見られなかった。今回の結果からプラスミドの核移行促進を達成するには、NLS-プラスミドコンジュゲート体のスペーサー長や化学修飾法を種々検討するだけでは不充分であり、更なる仕組みが必要であることが明らかとなった。

It is very important to have an upward response rate for non-commercial applications. The method of solving the problem is to promote the transfer of nuclear resources to the outside world. Nuclear transfer to foreign countries (NLS) to foreign countries, to foreign countries and to foreign countries. This is the first time that NLS has made an upward study of the problem point by using the rate of interest rate. There is a total combination of two methods: normal writing, writing and writing. I don't know. I don't know. I don't know. The purpose of this study is to improve the performance of the system. In this study, you need to improve the performance of the system. In this study, you need to improve the performance of the system. In this study, you need to improve the performance of the system. There is a combination of NLS, DNA, PEG, gene, and so on. In this way, there is a combination of DNA synthesis, NLS, β and β complex formation to facilitate the formation of the complex. The result of the test is higher than that of the NLS-. The result of the test is higher than that of the control. The results show that the results of NLS- monitoring and NLS- monitoring are important to improve the performance of the system. The results show that the promotion of nuclear transfer is not sufficient for the promotion of nuclear transfer, and it is necessary for members of the staff to make sure that all kinds of chemical modification methods are not sufficient for the promotion of nuclear transfer and the promotion of nuclear transfer and NLS-.

项目成果

Takeshi Nagasaki: "Can nuclear localization signals enhance nuclear localization of plasmid DNA?"Bioconjugate Chem.. 14(in press). (2003)

Takeshi Nagasaki：“核定位信号能否增强质粒 DNA 的核定位？”Bioconjugate Chem.. 14（出版中）。

Takeshi Nagasaki: "Photo-enhancement of transfection efficiency with a novel azobenzene-based cationic lipid"Chem.Lett.. 32. 88-89 (2003)

Takeshi Nagasaki：“利用新型偶氮苯基阳离子脂质提高转染效率的光增强”Chem.Lett.. 32. 88-89 (2003)

Takeshi Nagasaki: "Photo-enhancement of transfection efficiency using novel cationic lipids having photo cleavable spacer"Bioconjugate Chem.. 14(in press). (2003)

Takeshi Nagasaki：“使用具有光可裂解间隔基的新型阳离子脂质来提高转染效率的光增强”Bioconjugate Chem.. 14（印刷中）。

長崎 健: "第二世代に突入した合成ベクター開発"科学. 57. 56-57 (2003)

Ken Nagasaki：“合成载体开发已进入第二代” Science 57. 56-57 (2003)。