全脳虚血後海馬グリア細胞におけるTGF-β1/Smadシグナルの機能的意義の解明

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今年度はin vitro虚血模擬実験系でのグリア細胞における細胞増殖および貪食能について調べた。具体的にはニューロンーグリア共培養細胞に酸素/グルコース除去（OGD）処置を負荷することによって神経細胞を死滅させ、その培養上清を別に用意した混合グリア細胞に添加した。コントロール実験として、OGD未負荷のニューロンーグリア共培養細胞の上清を混合グリア細胞に添加した。細胞増殖は、OGD負荷ニューロン-グリア共培養細胞由来の上清をグリア細胞に添加してから１日後にMTTアッセイによって評価した。すると、OGD負荷培養細胞由来上清添加を受けたグリア細胞では、コントロールグリア細胞よりもMTTアッセイの測定値が高くなり、OGD負荷培養細胞由来上清にグリア細胞増殖誘導効果があると思われた。OGD負荷培養細胞由来上清によって誘導されるグリア細胞増殖へのTGF-β1（10mg/ml）の影響を調べたところ、TGF-β1はOGD負荷培養細胞由来上清誘導性のグリア細胞増殖を変化させなかった。TGF-β1（10mg/ml）はその下流シグナルであるSmadをリン酸化させる効果を有していた。一方、OGD負荷培養細胞由来上清誘導性のグリア細胞増殖へのTGF-βシグナル阻害剤であるSB525334（10mg/ml）あるいはP144の影響を調べたところ、いずれの薬剤もグリア細胞を減少させる効果を発揮した。SB525334およびP144によるグリア細胞減少効果はOGD負荷ニューロン-グリア共培養細胞由来上清添加の有無にかかわらず認められた。これらの結果はTGF-βシグナルがグリア細胞の生存に必要な因子であることを示唆する。貪食能についてはOGD負荷培養細胞由来の上清をグリア細胞に添加してから１日後に蛍光ビーズ取り込み能によって評価した。その結果、OGD負荷培養細胞由来上清は蛍光ビーズ取り込み能を変化させなかった。