膜タンパク陽性エクソソームによる肉腫の超早期診断法の開発と、膜タンパクの機能解析

利用膜蛋白阳性外泌体开发肉瘤超早期诊断方法及膜蛋白功能分析

• 批准号: 21K09318
• 负责人: 渡邉 裕美子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09318/
• 关键词: 肉腫; エクソソーム; リキッドバイオプシー; エクソソーム膜タンパク; 膜タンパクA; エクソソーム膜; 膜タンパクA陽性エクソソーム

マウス骨肉腫高肺転移株LM8とその親株であるDann骨肉腫細胞株（低肺転移株）の培養上清よりエクソソームをペレットダウン法で回収し、mass spectrometerを用いてプロテオーム解析を行い、さらに細胞株のcDNAマイクロアレイデーター、Pathway解析を参考にして10種類のタンパクを肺転移関連エクソソーム膜タンパクXｓとして同定した。現在、分子量約64kDaの膜タンパクAを中心に解析を行っており、多くの肉腫細胞株や癌細胞株で高発現していることや、免疫組織学的染色により肉腫の80%で高発現していることを確認した。nativeな膜タンパクAを検出できる新規マウスモノクローナル抗体をDNA免疫法で作成、CD9/膜タンパクAエクソソームELISA kitを独自に構築することに成功した。肉腫患者35例と、コントロール群15例（良性腫瘍患者8例、非腫瘍性運動器疾患患者7例）の血清膜タンパクA陽性エクソソーム量を測定した。肉腫別や患者背景による膜タンパクA陽性エクソソーム量を統計解析し、イムノアッセイ法の確立を目指している。

Culture supernatant of high lung cancer cell line LM8 and parent strain of Dann osteoma cell line (low lung cancer cell line) was analyzed by mass spectrometer. cDNA of cell line was analyzed by mass spectrometer. Reference was made to 10 kinds of cDNA. Now, the molecular weight of about 64kDa membrane protein A center analysis, many of the tumor cell lines and cancer cell lines are highly visible, and immunohistochemical staining, 80% of the tumor is highly visible. The native CD9/CD9/CD8 ELISA kit was successfully constructed by DNA immunoassay. The serum membrane protein levels were measured in 35 patients with sarcoma and 15 patients with benign sarcoma (8 patients with benign sarcoma and 7 patients with non-cancerous motor disease). Statistical analysis of the number of positive cases in patients with breast cancer and the establishment of the method of breast cancer