Comprehensive research on the roles of thyroid function involved in differentiation and proliferation of spermatogonial stem cells

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精巣発育不全症候群（Testicular dysgenesis syndrome：TDS）における造精機能障害の原因の一つに、幼若期の精子幹細胞の分化異常が挙げられる。私たちはTDSを対象に、精子幹細胞の分化状態を反映するバイオマーカーを確立すべく基礎研究を進めてきた。精子幹細胞は周囲環境からシグナルを受けて前駆細胞から分化・増殖するとされているが、その全容は明らかでない。本研究では、TDS患児における精巣機能の指標を確立することを目指し、精子幹細胞の分化過程に甲状腺機能がどう関与するか解明することを目的とした。そこで本研究では、研究Ⅰ：精巣の器官培養系を用いたTSH作用機序の解明、研究Ⅱ：幼若精巣に対するT3/T4作用の解析、研究Ⅲ：甲状腺低下/亢進モデル動物における精巣組織の解析、研究Ⅳ：ヒト停留精巣・遊走精巣における甲状腺機能の検討、の4つを立案した。本年度は、昨年度に引き続き研究Ⅰを行った。正常ラットの幼若期の精巣を採取し器官培養を繰り返し行い、安定して観察することが可能であることを確認した。また、研究Ⅳに関しては、先天性甲状腺機能低下症を合併した停留精巣・遊走精巣の精巣組織だけでなく、合併していない精巣組織についての検討も行った。生検で得られた精巣組織を利用し、生殖細胞の特異的マーカーであるDDX4抗体で免疫染色を行い、精細管あたりの精子形成細胞数をカウントした。本年度はこのカウント方法について根本的に見直しを行った。本学の研究室に新たに導入された顕微鏡BZ-X800（キーエンス、大阪）を用いて行った。プレパラート上の画像をコンピュータ内へ取り込み連結させたのち、定量解析ソフトウェアを用いて、精細管数および、内部の細胞数を自動で計測することに成功した。これらの操作によって、観察者の主観による揺らぎや計測間違いを減らし、より客観的なデータ解析が可能となった。