シングルセル解析による内リンパ嚢の発生メカニズムの解明
通过单细胞分析阐明内淋巴囊发育机制
基本信息
- 批准号:21K09602
- 负责人:
- 金额:$ 2.66万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2021
- 资助国家:日本
- 起止时间:2021-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
前庭水管拡大症は先天性難聴で最も頻度の高い内耳奇形である。前庭水管拡大症の多く は常染色体劣性遺伝の形式をとり、難聴と甲状腺腫を特徴とするペンド レッド症候群、または甲状腺腫を伴わない非症候性難聴DFNB4に伴って発症する。その原因遺伝子は、細胞膜で陰イオントランスポーターとして機能するペンド リン/SLC26A4 である。 ペンドリンは内耳では蝸牛の外ラセン溝細胞、前庭の移行細胞、および内リンパ嚢のイ オノサイトである mitochondria-rich cell (MRC)に発現する。近年の研究から、胎生期の内リンパ嚢において内リンパ吸収を担っている MRC の機能不全が、この疾患の病態に強く 関与することがわかってきた。 本研究の目的は、シングルセル遺伝子解析を用いて、マウス内リンパ嚢の MRCがどのような機構で分化するのかを明らかにすることにある。本研究で得られた成果から、生体内での前駆細胞から MRC への分化誘導や、ES/iPS 細胞から分化した細胞の移植といった 戦略により、前庭水管拡大症の治療法の確立につ ながることが期待できる。初年度は内リンパ嚢の単一細胞懸濁液を効率的に収集する処理方法を検討した。当初計画していたcollagenase+Dispaseの混合液ではなく、LiberaseTM+Dnaseで 37℃、30分振盪するプロトコルがもっとも生細胞を効率よく収集できることが判明した。このプロトコルにて、野生型(C57BL/6J)妊娠マウス1匹より胎生14.5日齢の胎仔を10匹採取し、顕微鏡下で内リンパ嚢を周辺組織を含めて摘出した。採取組織をプールして単一細胞に解離し、Chromium ControllerシステムでシングルセルcDNAライブラリを作成しRNA-seqを行った。得られたシングルセルデータに対し、Rの各種シングルセル解析パーケージを用いて、クラスタリングと発現変動遺伝子の検出、各クラスターのアノテーション、エンリッチメント解析、軌道解析を行った。
The vestibular aqueduct is large and congenital difficult. Vestibular aqueduct enlargement is characterized by multiple autosomal recessive forms, difficulty, goiter, and nonsymptomatic difficulty associated with DFNB4. The reason for this is that the cell membrane has a different function. In the inner ear, mitochondria-rich cells (MRC) occur in the outer groove cells, vestibular transitional cells, and inner vestibule cells of snails. In recent years, research has been carried out on the dysfunction of MRC, the strong relationship between the disease and the development of MRC. The purpose of this study is to analyze the molecular structure of the MRC and to clarify the molecular structure of the MRC The results of this study include the induction of differentiation of MRC cells in vivo, the transplantation of ES/iPS cells, and the establishment of treatment methods for vestibular aqueduct enlargement. A new method of processing the cell suspension in the first year is discussed. The initial plan was to mix collagenase+Dispase at 37℃ for 30 minutes to determine the cell growth rate. The wild-type (C57BL/6J) pregnancy was carried out in 10 fetuses born at 14.5 days old. A cell dissociation protocol was developed to generate RNA-seq from the DNA sequence of the chromosome. To obtain the information of the various types of groups, the analysis of the various types of groups, the detection of the dynamic elements, the analysis of the various types of groups, and the analysis of the orbit.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Dissection of the Endolymphatic Sac from Mice.
- DOI:10.3791/62375
- 发表时间:2021-03-29
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Honda K;Lee HJ;Griffith AJ;Roux I
- 通讯作者:Roux I
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本田 圭司其他文献
胎児横隔膜ヘルニアとの鑑別が困難であった serpentine-likesyndrome の症例
与胎儿膈疝难以鉴别的蛇纹样综合征一例
- DOI:
- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
本田 圭司;渡邊 浩基;大岡 知樹;山崎 あやめ;鈴木 康弘;堤 剛;味村和哉. 遠藤誠之. 松岡圭子. 冨松拓治. 田附裕子. 奥山宏臣. 竹内 真. 木村 正. - 通讯作者:
味村和哉. 遠藤誠之. 松岡圭子. 冨松拓治. 田附裕子. 奥山宏臣. 竹内 真. 木村 正.
1年の経過で著明な内リンパ水腫縮小を認めたメニエール病確定診断例の1例
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- DOI:
- 发表时间:
2021 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
古賀 千佳子;本田 圭司;渡邊 浩基;大岡 知樹;山崎 あやめ;鈴木 康弘;堤 剛 - 通讯作者:
堤 剛
胎盤ポリープ:当院における妊娠中期の中絶や流産処置を行った345 例からの検討
胎盘息肉:我院345例妊娠中期流产及流产病例的研究
- DOI:
- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
梶野 晃雅;本田 圭司;渡邊 浩基;大岡 知樹;山崎 あやめ;鈴木 康弘;堤 剛;味村和哉. 遠藤誠之. 三宅達也. 柿ヶ野藍子. 松崎慎哉. 川西陽子. 冨松拓治. 木村 正. - 通讯作者:
味村和哉. 遠藤誠之. 三宅達也. 柿ヶ野藍子. 松崎慎哉. 川西陽子. 冨松拓治. 木村 正.
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显微CT观察小鼠产后耳囊钙化过程
- DOI:
- 发表时间:
2021 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
白 静;伊藤 卓;川島 慶之;藤川 太郎;本田 圭司;渡邊 浩基;倉田 奈都子;堤 剛 - 通讯作者:
堤 剛
回旋性サッケードのmain sequenceのサンプリング頻度による差について
差异取决于旋转扫视主序列的采样频率
- DOI:
- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
堤 剛;池田 卓生;渡邊 浩基;竹田 貴策;本田 圭司;伊藤 卓 - 通讯作者:
伊藤 卓
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$ 2.66万 - 项目类别:
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- 批准号:
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- 资助金额:
$ 2.66万 - 项目类别:
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