Role and clinical application of exosome in corneal transplantation

角膜移植術後の拒絶反応制御は角膜移植のドナー角膜の生着に最も重要である。角膜移植後のドナー角膜の抗原認識は、抗原の直接認識・間接認識様式で行われていることは明らかだが、実際にドナー角膜の抗原情報が何によって転送されているかは不明であった。近年細胞間の情報伝達に細胞外小胞の一種であるエクソソームが関与しており、このエクソソームが細胞の変異、腫瘍細胞の免疫寛容性の獲得などに重要な役割を果たしていることが明らかになっている。そこで本研究では、ドナー角膜由来のエクソソームが角膜移植後のシグナル伝達に果たす役割を明らかにすることを目的とした検討を行った。まずエクソソームの効率のよい回収法を検討した。マウス角膜実質をエクソプラント法で初代培養し、P1細胞を10cmディッシュで培養しコンフルエントの状態で上清を採取し、ポリマー沈殿法、超遠心分離法、表面抗原アフィニティー法、ホスファチジルセリンアフィニティー法でエクソソームの回収を試みた。ホスファチジルセリンアフィニティー法でもっとも回収率、純度とも良好であったので、検討はすべてホスファチジルセリンアフィニティー法で実施することとした。次に混合リンパ球培養試験でエクソソームによる感作が成立するか否かを検討した。BALB/c の脾細胞を溶血しシングルセル作製し、１well当たり500000のBALB/cの脾細胞を用意した。C57BL/6の培養角膜実質細胞のウエルにBALB/c由来の脾細胞を混合したものをコントロールとし、あらかじめC57BL/6由来培養角膜実質由来エクソソーム添加したものと、XTT細胞増殖アッセイで細胞増殖能の違いを検討した。結果としてエクソソームを反応させた群で有意に強い細胞増殖反応を示したことから、エクソソームが細胞の感作に貢献していることが明らかとなった。

角膜移植術後の拒絶反応制御は角膜移植のドナー角膜の生着に最も重要である。角膜移植後のドナー角膜の抗原認識は、抗原の直接認識・間接認識様式で行われていることは明らかだが、実際にドナー角膜の抗原情報が何によって転送されているかは不明であった。近年細胞間の情報伝達に細胞外小胞の一種であるエクソソームが関与しており、このエクソソームが細胞の変異、腫瘍細胞の免疫寛容性の獲得などに重要な役割を果たしていることが明らかになっている。そこで本研究では、ドナー角膜由来のエクソソームが角膜移植後のシグナル伝達に果たす役割を明らかにすることを目的とした検討を行った。まずエクソソームの効率のよい回収法を検討した。マウス角膜実質をエクソプラント法で初代培養し、P1細胞を10cmディッシュで培養しコンフルエントの状態で上清を採取し、ポリマー沈殿法、超遠心分離法、表面抗原アフィニティー法、ホスファチジルセリンアフィニティー法でエクソソームの回収を試みた。ホスファチジルセリンアフィニティー法でもっとも回収率、純度とも良好であったので、検討はすべてホスファチジルセリンアフィニティー法で実施することとした。次に混合リンパ球培養試験でエクソソームによる感作が成立するか否かを検討した。BALB/c の脾細胞を溶血しシングルセル作製し、１well当たり500000のBALB/cの脾細胞を用意した。C57BL/6の培養角膜実質細胞のウエルにBALB/c由来の脾細胞を混合したものをコントロールとし、あらかじめC57BL/6由来培養角膜実質由来エクソソーム添加したものと、XTT細胞増殖アッセイで細胞増殖能の違いを検討した。結果としてエクソソームを反応させた群で有意に強い細胞増殖反応を示したことから、エクソソームが細胞の感作に貢献していることが明らかとなった。