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Regulation of signal response through a novel DKK1 receptor "CKAP4"

通过新型 DKK1 受体“CKAP4”调节信号反应

基本信息

批准号：
20K07311
负责人：
山本英樹
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

私が所属する研究室では主に小胞体(ER)に局在するCKAP4が細胞膜にも局在し、DKK1受容体として機能することを見出したがCKAP4がERに停留する機構や細胞膜へ輸送される機構は不明であった。昨年度まで、S2-CP8細胞においてトランスゴルジ膜画分と細胞膜画分のCKAP4の結合分子として同定したAnnexin A2とCKAP4の細胞膜局在との関連を解析した。その結果、Annexin A2はCKAP4の細胞質領域と結合することにより、CKAP4の細胞膜への輸送を制御すること、その輸送制御にはAnnexin A2のC末端側に存在するリン脂質結合部位が必要であることを明らかにした。本年度はCKAP4のERからゴルジ体への輸送とCKAP4のERへの停留の分子機構を解析した。膵がん細胞株S2-CP8細胞、あるいは肺がん細胞株A549細胞を15℃、2時間処理するとERGICに局在するCKAP4の割合が増加し、10℃、2時間処理するとER exit siteに局在する割合が増加した。COPII依存性ERからゴルジへの輸送を制御するMIA3をノックダウンすると37℃処理においてもCKAP4はERに局在した。一方、COPIを構成するサブユニットのβ-COPをノックダウンすると15℃、2時間処理してもERGICとゴルジ体に局在する割合が37℃処理と変わらず、ERGICに局在するCKAP4の割合が増加しなかった。また、Annexin A2の発現抑制によって、DKK1依存性のAKT活性化が抑制された。したがって、１）ERからCOPIIを介してゴルジ体に輸送されたCKAP4が細胞膜に輸送されることがDKK1-CKAP4-AKTシグナル活性化に必要であること、２）ゴルジ体からCOPIを介してERに輸送され、ERに停留することが示唆された。

The main cell body (ER) of the research laboratory is CKAP4. The receptor body is CKAP4. The relationship between Annexin A2 and CKAP4 binding molecules in S2-CP8 cells was analyzed. As a result, Annexin A2 binds to CKAP4 in the cytoplasmic domain, and CKAP4 is transported to the cellular membrane. The transport of Annexin A2 is controlled by the presence of a lipid binding site on the C-terminal side of Annexin A2. This year, we analyzed the molecular mechanism of CKAP 4 ER and CKAP4 ER. Cell line S2-CP8 and cell line A549 were treated at 15℃ for 2 hours, and the cleavage of CKAP4 increased at 10℃ for 2 hours. COPII dependent ER transport control MIA3 processing at 37℃ CKAP4 processing at 37℃One side, COPI composition, and the other side, and the other side, and the other side DKK1-dependent AKT activation was inhibited. 1) COPII is mediated by ER, CKAP4 is mediated by DKK1-CKAP4-AKT, and 2) COPII is mediated by ER, CKAP4 is mediated by ER, and CKAP4 is mediated by ER.