Regulation of signal response through a novel DKK1 receptor "CKAP4"

点击翻译按钮获取中文摘要

私が所属する研究室では主に小胞体(ER)に局在するCKAP4が細胞膜にも局在し、DKK1受容体として機能することを見出したがCKAP4がERに停留する機構や細胞膜 へ輸送される機構は不明であった。昨年度まで、S2-CP8細胞においてトランスゴルジ膜画分と細胞膜画分のCKAP4の結合分子として同定したAnnexin A2とCKAP4の 細胞膜局在との関連を解析した。その結果、Annexin A2はCKAP4の細胞質領域と結合することにより、CKAP4の細胞膜への輸送を制御すること、その輸送制御にはAnnexin A2のC末端側に存在するリン脂質結合部位が必要であることを明らかにした。本年度はCKAP4のERからゴルジ体への輸送とCKAP4のERへの停留の分子機構を解析した。膵がん細胞株S2-CP8細胞、あるいは肺がん細胞株A549細胞を15℃、2時間処理するとERGICに局在するCKAP4の割合が増加し、10℃、2時間処理するとER exit siteに局在する割合が増加した。COPII依存性ERからゴルジへの輸送を制御するMIA3をノックダウンすると37℃処理においてもCKAP4はERに局在した。一方、COPIを構成するサブユニットのβ-COPをノックダウンすると15℃、2時間処理してもERGICとゴルジ体に局在する割合が37℃処理と変わらず、ERGICに局在するCKAP4の割合が増加しなかった。また、Annexin A2の発現抑制によって、DKK1依存性のAKT活性化が抑制された。したがって、１）ERからCOPIIを介してゴルジ体に輸送されたCKAP4が細胞膜に輸送されることがDKK1-CKAP4-AKTシグナル活性化に必要であること、２）ゴルジ体からCOPIを介してERに輸送され、ERに停留することが示唆された。