肺高血圧症病態におけるHOX遺伝子の関与と治療応用の探索

HOX基因在肺动脉高压病理学中的参与及治疗应用探索

• 批准号: 20K17114
• 负责人: 木村 昌弘
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17114/
• 关键词: 肺高血圧症; HOX遺伝子; Hippoシグナル; 血管平滑筋細胞

１．肺高血圧モデルラットを用いたHoxa4の発現変化：一般的なラット肺高血圧モデルであるモノクロタリン投与モデルにおいて、肺でのHoxa4の発現変化をリアルタイムPCRにて確認した。肺高血圧肺ではこれまでの既報どおり、Yap/Tead標的遺伝子であるCtgfやTgfb1の発現上昇を認める一方、Hoxa4の発現は低下していた。２．Hoxa4発現AAVベクターの作成：AAV9をベースに、Hoxa4発現AAVベクターの作成を行った。マウスHoxa4に対する抗体はnonspecificなsignalが強く検出されたため、Hoxa4の局在を免疫蛍光染色等で検出しやすいように、Hoxa4-EmGFPを融合タンパクとして発現するベクターを作成した。この融合タンパクにおいてもHoxa4単独投与と同様に細胞核へ移行し、またヒト大動脈血管平滑筋細胞へ導入するとGFP陽性細胞において著明な細胞増殖の抑制を認めた。さらに、HOXA4が導入されたヒト大動脈血管平滑筋細胞ではAktのリン酸化が減少しており、一方でHOXA4をノックダウンさせると、Aktのリン酸化が亢進していた。３．Hoxa4発現AAVベクターのマウスへの投与：8週齢の雄マウスに18Gサーフロー針の外筒を気管内挿管し、作成したAAV-Hoxa4-EmGFPを投与し、2週間後と4週間後に肺を摘出して、RNA発現および免疫蛍光染色を確認した。４．Hoxa4由来ポリペプチドの作製：Hoxa4のtruncated mutantを複数作成し、そのうちの120アミノ酸からなるタンパクをヒト血管平滑筋細胞へレンチウイルスを用いて発現させると、TEAD応答性ルシフェラーゼ活性が低下することを確認した。また、このtruncated mutantはYAP恒常活性体（YAP-5SA）によるヒト血管平滑筋細胞の増殖を抑制した。

1. High pulmonary blood pressure (Hoxa4), pulmonary hypertension, lung The high blood pressure of the lungs, the children of the Yap/Tead, the Ctgf, the Tgfb1, the Hoxa4, the children, the lungs, the lungs and the lungs. 2.Hoxa4 shows that the AAV has been made: AAV9 has been made, and Hoxa4 has shown that the AAV has been made into a row. The antibody nonspecific signal strongly showed that the antibody was detected by immunostaining, and the fusion of Hoxa4-EmGFP was detected by light staining and Hoxa4-EmGFP fusion. In this study, the fusion gene Hoxa4 was used alone to induce the proliferation of vascular smooth muscle cells into GFP cells, which showed that the cell colonization inhibition was confirmed. The blood vessel smooth muscle cells, Akt smooth muscle cells, Akt smooth muscle cells, HOXA4 smooth muscle cells, Akt smooth muscle cells, Akt smooth muscle cells, vascular smooth muscle cells, vascular smooth muscle 3.Hoxa4 showed that the lung was extracted from the lungs after 2 years of treatment, and the lung was removed after 4 weeks. 3.Hoxa4 showed that the lung was removed after 2 years of treatment, and the lung was removed after 4 weeks. 3.Hoxa4 showed that the lung was removed, and RNA was immunoreactive by light staining. The causes of 4.Hoxa4 are as follows: Hoxa4, truncated mutant, complex, acid, acid, smooth muscle, smooth muscle, smooth muscle Truncated mutant, YAP constant active bodies (YAP-5SA), vascular smooth muscle cells, proliferative inhibition cells.

项目成果

Elucidating the Involvement and Molecular functions of Homeotic Genes in the Pathogenesis of Vascular Diseases

阐明同源基因在血管疾病发病机制中的参与和分子功能

• 发表时间: 2021
• 作者: Hidenori Kojima;Taketaro Sadahiro;Naoto Muraoka;Hiroyuki Yamakawa;Hisayuki Hashimoto;Ryota Ishii;Masahiko Gosho;Yuto Abe;Yu Yamada;Koji Nakano;Seiichiro Honda;Ryo Fujita;Tatsuya Akiyama;Yoichi Sunagawa;Tatsuya Morimoto;Toshifumi Tsukahara;Masahiro Kimura
• 通讯作者: Masahiro Kimura

京都大学医学部附属病院 循環器内科 基礎研究グループ 分子循環器グループ

京都大学医院心脏病科基础研究组分子心脏病学组

HOX遺伝子を介した、新たな血管リモデリング制御機構の解明

HOX基因介导的新血管重塑控制机制的阐明

• 发表时间: 2020
• 作者: Cui Shihe;Hayashi Kenshi;et al.;木村昌弘
• 通讯作者: 木村昌弘

Elucidating the involvement and molecular functions of homeotic genes in the pathogenesis of pulmonary hypertension

阐明同源基因在肺动脉高压发病机制中的参与和分子功能

• 发表时间: 2020
• 作者: Aizawa Takanori;Wada Yuko;Hasegawa Kanae;Huang Hai;Imamura Tomohiko;Gao Jingshan;Kashiwa Asami;Kohjitani Hirohiko;Fukuyama Megumi;Kato Koichi;Kato Eri Toda;Hisamatsu Takashi;Ohno Seiko;Makiyama Takeru;Kimura Takeshi;Horie Minoru;Masahiro Kimura
• 通讯作者: Masahiro Kimura