マイクロRNAの発現異常によって維持される癌特異的HOX遺伝子ネットワークの解明

阐明由异常 microRNA 表达维持的癌症特异性 HOX 基因网络

基本信息

批准号：
18012001
负责人：
浜田淳一
金额：
$ 6.72万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は,癌特異的HOXコードの異常を引き起こす原因のひとつとしてマイクロRNA(miRNA)を証明することである.ヒトマイクロRNAのひとmiR-196a-1の二本鎖RNAを合成し,4種類のヒト細胞株に導入し,39個のHOX遺伝子の発現変化を定量的RT-PCR法で解析したところ,miR-196a-1はすべての細胞株のHOXA7の発現を低下させることがわかった.また,miR-196a-1の発現が高いヒト乳癌細胞はHOXA7の発現が低いことも明らかとなった.自由エネルギー最小化探索を利用したinsillco解析から,miR-196a-1によって認識される可能性が最も高いHOXA7のmRNA配列は,3'-UTRに5箇所存在することが予測された.そこで,5箇所のうちどれが最も重要であるのかを,ルシフェラーゼを利用したレポーターアッセイで解析した.その結果,5箇所いずれもmiR-196a-1の標的となること,さらに発現抑制効果は標的領域の数に依存して高くなることがわかった.miR-196a-1発現ベクターを作製し,miR-196a-1の発現が低いヒト乳癌細胞に過剰発現させ,細胞増殖性について検討した.miR-196a-1過剰発現細胞は,非発現細胞に比べ,足場非依存性の増殖能が高いことが明らかになった.現在,miR-196a-1過剰発現ヒト乳癌細胞のinvivoにおける増殖・転移性について調べている.以上の成果は,miR-196a-1はHOXA7の発現抑制を介して癌細胞の増殖を増強させることを示唆している.

这项研究的目的是证明microRNA（miRNA）是癌症特异性HOX代码异常的原因之一。合成了人miR-196a-1的双链RNA并将其引入四种人类细胞系，并通过定量RT-PCR方法分析了39个HOX基因的表达变化，而miR-196aA-1降低了所有细胞系中HOXA7的表达。还揭示了miR-196a-1高表达的人类乳腺癌细胞的HOXA7表达较低。使用自由能最小化搜索的Insillco分析预测，最有可能被miR-196a-1识别的Hoxa7的mRNA序列存在于3'-UTR中的五个位置。使用荧光素酶的记者测定法分析了这五个站点的最重要方面。结果表明，所有五个位点均由miR-196a-1靶向，并且根据目标区域的数量，表达抑制作用增加了。制备了miR-196a-1表达载体，并在人类乳腺癌细胞中过表达miR-196a-1，并检查了细胞增殖。据表明，与非表达细胞相比，miR-196a-1过表达的细胞具有更高的锚固非依赖性增殖能力。我们目前正在研究MiR-196a-1过表达人类乳腺癌细胞的增殖和转移特性。以上结果表明，miR-196a-1通过抑制HOXA7的表达来增强癌细胞的增殖。