权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

CaMKII導入によるシナプス可塑性の構築

通过引入CaMKII建立突触可塑性

基本信息

批准号：
03J50161
负责人：
木村昌弘
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J50161/
关键词：
可塑性 Calyx of Held CaMKII シナプス

项目摘要

(A) 通常状態でのCalyx-MNTBシナプスにおけるCaMKII分子の発現と機能確認(1)MNTB領域における・CaMKII、・CaMKIIのタンパク発現量が海馬の1%以下であることをwestern法によって定量化し確認。これにより通常な状態ではCaMKII分子によるシナプス伝達効率の効果はないと判断した。(2)Calyx-MNTBシナプス入力をLTPまたはLTDの誘発プロトコールで刺激してもLTP、LTDのいずれも誘発されないことを確認した。興奮性後細胞シナプス電流はLTPまたはLTDの誘発プロトコール刺激前後での変化を見せず、Calyx-MNTBシナプスは通常、海馬などで見られるLTPまたはLTDの誘発プロトコールでは可塑性の発現がないと判断した。(B)CaMKIIのシナプス部への強制導入(1)シナプス後細胞への導入活性型CaMKII をMNTB 細胞内に注入し、低頻度刺激時におけるEPSCの振幅に変化が生じるか否かを測定した。LTPまたはLTDなどの可塑性は観察されなかった。(2)シナプス後細胞強制導入時における頻回刺激100Hzの高頻度刺激を与え、シナプス後細胞を電位固定することで興奮性後細胞シナプス電流の観察を行った。結果、興奮性後細胞シナプス電流はLTPまたはLTDの誘発プロトコール刺激前後での変化を見せる場合と見せない場合があることがわかった。(C)シナプス部への強制導入の成果シナプス前細胞へCaMKiiを強制導入できる特殊電極システムを開発した結果、化合物(BAPTAなど)をはじめとした強制導入に成功している。この強制導入システム開発の途中でカルレチニンと呼ばれるCaMKIIと比較してやや低分子なタンパク質の導入に成功した。現在カルレチニンの機能について精査し論文の投稿準備をしている。またCaMKIIはその分子の大きさによって外部からの強制導入に成功しなかった。

(A)The expression and function confirmation of CaMKII molecule in normal state (1) The expression of CaMKII and CaMKII in MNTB domain is less than 1% of hippocampus. The results of the analysis of CaMKII molecules in the normal state are as follows: (2)Calyx-MNTB is the only one that can be used to stimulate LTP and LTD's development. After excitatory cell growth, the changes of LTP induced cell growth before and after stimulation, Calyx-MNTB induced cell growth, hippocampus induced cell growth and plasticity were detected. (B) Stress introduction of CaMKII into MNTB cells (1) Measurement of the amplitude of EPSC during injection of CaMKII into MNTB cells and during low-frequency stimulation. The plasticity of LTP was observed. (2)When stress is introduced into the cells, the frequency of stimulation is 100Hz. The high frequency of stimulation is 100Hz. The potential of the cells is fixed. The current of the excitatory cells is observed. Results: Excitatory post-cell current changes before and after stimulation of LTP and LTD (C)The results of stress introduction of CaMKii were successfully developed by stress introduction of special electrodes and compounds (BAPTA). The introduction of low molecular weight compounds into the CaMKII was successful. Now, the function of "Call Center" is to carefully review and prepare papers for submission. CaMKII was successfully introduced under stress from the outside.