内在性線維芽細胞・基質複合体被覆下における液性因子処理移植腱再構築促進の機序解明

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本研究の目的は、外因性の液性因子の投与が生体内の自家移植腱の腱マトリクス再構築に与える効果とその分子機序を成熟雌NewZealand 白色家兎を用いて明らかにし、移植腱マトリクスの再構築過程を制御するための基盤を築くことである。2020年度は、成熟雌NewZealand 白色家兎用い、右膝の自家腱を、すでに開発した方法である液体窒素プローブ(Am J Sports Med 2000)を用いて凍結解凍処理して内在性線維芽細胞を壊死させ、無細胞腱マトリクスを作製した。大腿骨側で切離した被損傷前十字靱帯組織の中に無細胞腱マトリクスを通し移植した(被覆群)。対象群では別の成熟雌NewZealand 白色家兎の右膝の自家腱を被損傷前十字靱帯組織で被覆せずに同様の方法で移植した (非被覆群)。移植後3週で屠殺し移植腱-靭帯組織を採取し、腱靭帯再構築の初期過程における病理学的組織変化および発現因子を解析するためのモデルを構築し、被覆群および非被覆群を比較を目的とした至適サンプルの評価を組織病理学的および免疫組織学的に検討した。病理組織学的に被覆群では被損傷前十字靱帯および移植腱は組織学的に結合性を認めた。一方、非被覆群では組織間に間隙を見とけ結合性を認めなかった。ま た、被覆群では組織間に円形の細胞を多数有する組織を介して連続し、免疫化学法にて腱靭帯の境界においてVEGFの高い発現を認め、腱靭帯再構築の初期における既知の組織学的変化および因子の発現を認めた。腱靭帯再構築過程における外因性液性促進因子の同定を目的として、遺伝子網羅的解析および機能分子の同定を目的とした実験を行った。