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In-cell分光法によるアミロイドβ産生制御機構・構造変化の解明と創薬

使用细胞内光谱阐明β淀粉样蛋白产生控制机制和结构变化以及药物发现

基本信息

批准号：
21H02615
负责人：
松崎勝巳
金额：
$ 10.98万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02615/
关键词：
アルツハイマー病

项目摘要

１）FTIR-ATR法を用いて、Aβ42がSH-SY5Y細胞上でつくるアミロイド線維が逆平行βシート構造を有することが明らかとなった。また、この構造は60時間の間、ほとんど変化しなかった。２）Aβ40の水中線維と細胞膜中線維をCongo redで染色し、その蛍光スペクトルを取得したが、両者で違いは見られなかったことから、本色素での両線維の区別はできないことが分かった。また、Curcumin染色も試みたが、細胞膜の非特異的な染色が見られたため、本色素も使用不可であった。３）Aβ40の2残基ずれの逆平行βシート構造をクロスリンクにより調製したが、顕著な細胞毒性は見られなかったことから、in-resister平行βシート構造との共存が毒性に重要であると考えられる。４）細胞膜上での2種のAβ(40および42)が共存するときのAβ凝集挙動を蛍光標識Aβを用い、蛍光相関分光法で調べたところ、一方のAβの凝集は他方の存在にあまり影響を受けなかったことからAβ40と42は、独立して凝集すると予想される。５）細胞膜中線維→水中線維の構造変化評価系構築のため、細胞膜中線維を単離することに成功した。６）商用の化合物データベース（473万エントリー）を用いて、Aβ40に結合する化合物の計算機スクリーニングを実施した。このスクリーニングで見出した化合物数種が細胞上でのAβ線維形成と細胞死を阻害できるかを検討したところ、細胞死を抑制する化合物を見出した。また、これまでの研究で得られたヒット化合物の類似化合物の探索を行った。

1) The FTIR-ATR method uses an anti-parallel β-beta structure on Aβ42 SH-SY5Y cells and an anti-parallel β-beam structure.また、このstructureは60时の间、ほとんど変化しなかった. 2) Aβ40’s midline dimension in water and cell membrane midline dimension をCongo redでdyeし、その蛍光スペクトルをgettingしたが、両者でviolationいは见られなかったことから、本色での両线dimensional のDIFFERENCE はできないことが分かった.また, Curcumin staining, みたが, non-specific な staining of cell membrane, が见られたため, this pigment cannot be used, であった. ３）Aβ40の2 residues and anti-parallel β-peptide structure and modulation and anti-cytotoxicityれなかったことから、in-resister parallel beta シート structure との coexistence がtoxicity にimportant であると卡えられる. ４) Two kinds of Aβ (40および42) coexist on the cell membrane, and Aβ agglutination is used to label Aβ by light, and it is adjusted by light correlation spectroscopy.ところ、One side's Aβ agglomeration and the other side's existence にあまり are affected by けなかったことからAβ40と42は, independent して aggregation すると yu want される. 5) The structural changes of the cell membrane midline dimension → the water midline dimension are evaluated and the cell membrane midline dimension is successfully constructed. ６）Commercial compound データベース (4.73 million エントリー) uses いて, Aβ40 and Aβ40 に compound のcomputer スクリーニングを実士した. There are several kinds of compounds that can be seen on the Aβ line in the cells. Death is a hindrance and the compound is a compound that inhibits cell death. Research on また, これまでの got られたヒット compounds and exploration of similar compounds.