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膜透過型細胞内ループを用いたGPCRのGタンパク質活性化機構解明

使用膜渗透性细胞内环阐明 GPCR 的 G 蛋白激活机制

基本信息

批准号：
17651125
负责人：
松崎勝巳
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスプロスタグランジンEP3β受容体(mEP3β)の第1〜第3細胞内ループ(i1〜i3)およびC末端尾部のペプチドのN末端をパルミトイル化し、膜透過型に改変することによって、Gタンパク質の直接活性化を試みた。まず、これら4種のペプチドをFmoc固相法で合成し、mEP3β発現CHO細胞に10μMの濃度で加え、スルプロストーンによる細胞内cAMP量の増加に対する抑制活性を再評価した。パルミチン酸のみ(コントロール)およびパルミトイル化i1〜i3では、cAMP量がわずかに(10-20%)減少したのみであったが、パルミトイル化C末では、50%減少し、アゴニスト様の活性が観察された。そこで、パルミトイル化C末をリポソームと様々な比率で混合し、トリプトファン蛍光を測定したところ、濃度依存的にブルーシフトが観察され、膜上での会合が示唆された。これに対し、パルミトイル化i2ではこのような変化は観測されなかったことから、パルミトイル化C末の会合がアゴニスト活性に関与していることが示唆された。また、ループペプチドの膜透過性向上のため、抗菌性ペプチドタキプレシンを用いる可能性についても検討した。タキプレシンIのN末端に分子量約5000のポリエチレングリコール(PEG)をペプチドモデルとして結合させたPEG-タキプレシンIを合成した。NBDラベルした多重層リポソームとジチオナイトを用いた実験から、PEG-タキプレシンIもタキプレシンI同様、膜透過性を有していることが明らかとなった。以上のように,膜透過塑ループペプチドはGPCRのGタンパグ質活性化機構解明に有用であることが明らかとなった.

The EP3 β acceptor (mEP3 β) was isolated from the first to the third cell (i1~i3). The tail of the C-terminal, the N-terminal, the membrane permeation, the G-terminal, and the direct activation were detected. The solid-phase synthesis of Fmoc, mEP3 β, and the concentration of camp in the CHO cell of 10 μ M were detected by the solid-phase synthesis method, the solid-phase synthesis method and the solid phase synthesis method. The concentration of camp (10-20%), the concentration of camp (10-20%), the concentration of i1~i3 (10-20%), the concentration of camp (10-20%), the concentration of camp (10-20%) and the amount of camp (10-20%). At the end of the day, the ratio is mixed, the light is measured, the temperature is dependent, and the rendezvous on the film indicates that it is instigated. Let's see if we can get together at the end of C so that we can rendezvous at the end of C. The permeability of the membrane was increased, and the possibility of the use of antibacterial drugs was studied. The molecular weight of the N-terminal is about 5000. The molecular weight of the N-terminal is about 5000. The molecular weight of the N-terminal is about 5000. The molecular weight of the N-terminal is about 5000. The molecular weight of the N-terminal is about 5000. The molecular weight of the N-terminal is about 5000. The combination of the molecular weight, the The NBD effect is different from each other. The results show that the performance of the membrane is the same as that of the PEG-, and the permeability of the membrane is different. In the above system, the film is permeable. The GPCR system is very useful.