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アミロイドβ蛋白の凝集開始初期過程の高感度解析

β淀粉样蛋白聚集起始过程的高灵敏度分析

基本信息

批准号：
16015258
负责人：
松崎勝巳
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルツハイマー病発症の第一段階は可溶性アミロイドbeta蛋白(Abeta)の毒性型凝集体への変換と神経細胞への沈着であり、この過程の分子機構の解明は、本疾患の予防・治療法の開発にとってきわめて重要である。我々は、膜の脂質ラフトにおいて、コレステロール依存的に形成されるガングリオシドのクラスターを可溶性Abetaが認識して結合し、凝集核となるガングリオシド結合型Abetaが形成されるとの仮説を,リポソーム膜を用いた実験結果をもとに立てている。本年度は,フルオレセインラベルAbeta-(1-40)(Flu-Abeta)を用い、PC12細胞上での凝集過程を共焦点レーザー顕微鏡で追跡した。細胞は本研究費で購入した凍結保存容器に保存した。GM1ガングリオシドを認識するAlexa Fluoro647標識コレラトキシンBサブユニットで強く染色される細胞膜上の領域(GM1-rich領域)にFlu-Abetaは蓄積し、蓄積量はFlu-Abeta濃度とインキュベート時間に依存して増大した。一方、予め培地中でプレインキュベートしたFlu-Abetaはほとんど細胞に結合しなかったことから、Flu-Abetaの蓄積は細胞膜上で起こったことが明らかとなった。Flu-Abetaが高度に蓄積した細胞はエチジウムホモダイマーで染色され死滅していた。また、メチルbetaシクロデキストリンで前処理してコレステロールを除去するとGM1-rich領域は消失し、Flu-Abetaの蓄積は抑制された。以上のように、リポソーム膜を用いた研究で観測された現象が、細胞レベルでも確認され、我々の仮説が指示された。

The first stage of the development of the disease is the transformation of toxic aggregates of soluble beta protein (Abeta) and the deposition of neurons, the elucidation of molecular mechanisms of this process, and the development of prevention and treatment of this disease. In addition, the formation of soluble Abeta in the lipid phase of the membrane and the formation of soluble Abeta in the lipid phase of the membrane and the formation of soluble Abeta in the lipid phase of the membrane and the formation of soluble Abeta in the lipid phase of the membrane and the formation of soluble Abeta in the lipid phase of the membrane are discussed. This year, the aggregation process on PC12 cells was traced by confocal microscopy using Flu-Abeta-(1-40). The cells are stored in frozen storage containers purchased at cost for this study. Alexa Fluoro647, a GM1 marker, is recognized as a fluoride-Abeta accumulation in the GM1-rich region of the cell membrane, and the accumulation increases depending on the fluoride-Abeta concentration and time. Flu-Abeta is the accumulation of Flu-Abeta on the cell membrane. Flu-Abeta is highly accumulated and the cells are dying. The GM1-rich domain disappears and the accumulation of Flu-Abeta is suppressed before processing. The above research on the use of complex membranes has been carried out to detect the phenomenon, cell cycle and identification, and to provide guidance.

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A seeed for Alzheimer amyloid in the brain

大脑中阿尔茨海默淀粉样蛋白的种子

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Neurosci. 24・20
影响因子：
0
作者：
Oinuma I;Katoh H;Negishi M;Uemura K. et al.;Yamashita et al.;Tomonaga;Kihara T et al.;Okamoto et al.;Shiozaki A et al.;Kanki R et al.;Sawada H et al.;Kohno R et al.;M.Wakabayashi et al.;H.Hayashi et al.
通讯作者：
H.Hayashi et al.

GM1 ganglioside-mediated accumulation of amyloid beta-protein on cell memebranes

GM1 神经节苷脂介导的淀粉样β蛋白在细胞膜上的积累

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Biochem.Biophys.Res.Commun. 328・4
影响因子：
0
作者：
Oinuma I;Katoh H;Negishi M;Uemura K. et al.;Yamashita et al.;Tomonaga;Kihara T et al.;Okamoto et al.;Shiozaki A et al.;Kanki R et al.;Sawada H et al.;Kohno R et al.;M.Wakabayashi et al.
通讯作者：
M.Wakabayashi et al.