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アミロイドβ蛋白の凝集開始初期過程の高感度解析

β淀粉样蛋白聚集起始过程的高灵敏度分析

基本信息

批准号：
16015258
负责人：
松崎勝巳
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルツハイマー病発症の第一段階は可溶性アミロイドbeta蛋白(Abeta)の毒性型凝集体への変換と神経細胞への沈着であり、この過程の分子機構の解明は、本疾患の予防・治療法の開発にとってきわめて重要である。我々は、膜の脂質ラフトにおいて、コレステロール依存的に形成されるガングリオシドのクラスターを可溶性Abetaが認識して結合し、凝集核となるガングリオシド結合型Abetaが形成されるとの仮説を,リポソーム膜を用いた実験結果をもとに立てている。本年度は,フルオレセインラベルAbeta-(1-40)(Flu-Abeta)を用い、PC12細胞上での凝集過程を共焦点レーザー顕微鏡で追跡した。細胞は本研究費で購入した凍結保存容器に保存した。GM1ガングリオシドを認識するAlexa Fluoro647標識コレラトキシンBサブユニットで強く染色される細胞膜上の領域(GM1-rich領域)にFlu-Abetaは蓄積し、蓄積量はFlu-Abeta濃度とインキュベート時間に依存して増大した。一方、予め培地中でプレインキュベートしたFlu-Abetaはほとんど細胞に結合しなかったことから、Flu-Abetaの蓄積は細胞膜上で起こったことが明らかとなった。Flu-Abetaが高度に蓄積した細胞はエチジウムホモダイマーで染色され死滅していた。また、メチルbetaシクロデキストリンで前処理してコレステロールを除去するとGM1-rich領域は消失し、Flu-Abetaの蓄積は抑制された。以上のように、リポソーム膜を用いた研究で観測された現象が、細胞レベルでも確認され、我々の仮説が指示された。

The first stage of amyloplastin disease is a toxic type of agglomerate of soluble amylopeta protein (Abeta). It is important to understand the secretion of cells, the molecular structure of the process, and the prevention and treatment of this disease. 々は, membrane lipid ラフトにおいて, コレステロールdepends on the formation されるガングリオシドのクラスターをsoluble Abetaがknowingして knot合し、agglutination core となるガングリオシド binding type Abeta が formation されるとの仮说を,リポソーム片を用いた実験RESULTSをもとに立てている. This year, the agglutination process on PC12 cells was traced using a confocal microscopy using FluoroAbeta-(1-40) (Flu-Abeta). The cells were purchased and stored in frozen storage containers at the cost of this research. GM1 ガングリオシドを Meet するAlexa Fluoro647 identifies the コレラトキシンB サブユニットでstrongく stained される area on the cell membrane (GM1-rich area ) is the accumulation of Flu-Abeta, and the accumulation amount is Flu-Abeta concentration and time dependence. One side, Yu Pei Di Chu's Flu-Abeta Cell Combination Systemかったことから、Flu-Abetaのaccumulation on the cell membrane でったことが明らかとなった. Flu-Abeta is highly concentrated and stains the cells, causing it to die.また、メチルbetaシクロデキストリンでPre-processingしてコレステロールをRemovalすThe GM1-rich field disappears, and the accumulation of Flu-Abeta is suppressed. Above, we can use it to research and measure the phenomenon of rhinoplasty membrane, and we can confirm the phenomenon of cells, and we can tell you how to instruct it.

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A seeed for Alzheimer amyloid in the brain

大脑中阿尔茨海默淀粉样蛋白的种子

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Neurosci. 24・20
影响因子：
0
作者：
Oinuma I;Katoh H;Negishi M;Uemura K. et al.;Yamashita et al.;Tomonaga;Kihara T et al.;Okamoto et al.;Shiozaki A et al.;Kanki R et al.;Sawada H et al.;Kohno R et al.;M.Wakabayashi et al.;H.Hayashi et al.
通讯作者：
H.Hayashi et al.

GM1 ganglioside-mediated accumulation of amyloid beta-protein on cell memebranes

GM1 神经节苷脂介导的淀粉样β蛋白在细胞膜上的积累

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Biochem.Biophys.Res.Commun. 328・4
影响因子：
0
作者：
Oinuma I;Katoh H;Negishi M;Uemura K. et al.;Yamashita et al.;Tomonaga;Kihara T et al.;Okamoto et al.;Shiozaki A et al.;Kanki R et al.;Sawada H et al.;Kohno R et al.;M.Wakabayashi et al.
通讯作者：
M.Wakabayashi et al.