アミロイドβ蛋白の凝集開始初期過程の高感度解析

β淀粉样蛋白聚集起始过程的高灵敏度分析

• 批准号: 16015258
• 负责人: 松崎 勝巳
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015258/
• 关键词: アルツハイマー病; アミロイドβ蛋白; 脂質ラフト; ガングリオシド; コレステロール; 細胞毒性

アルツハイマー病発症の第一段階は可溶性アミロイドbeta蛋白(Abeta)の毒性型凝集体への変換と神経細胞への沈着であり、この過程の分子機構の解明は、本疾患の予防・治療法の開発にとってきわめて重要である。我々は、膜の脂質ラフトにおいて、コレステロール依存的に形成されるガングリオシドのクラスターを可溶性Abetaが認識して結合し、凝集核となるガングリオシド結合型Abetaが形成されるとの仮説を,リポソーム膜を用いた実験結果をもとに立てている。本年度は,フルオレセインラベルAbeta-(1-40)(Flu-Abeta)を用い、PC12細胞上での凝集過程を共焦点レーザー顕微鏡で追跡した。細胞は本研究費で購入した凍結保存容器に保存した。GM1ガングリオシドを認識するAlexa Fluoro647標識コレラトキシンBサブユニットで強く染色される細胞膜上の領域(GM1-rich領域)にFlu-Abetaは蓄積し、蓄積量はFlu-Abeta濃度とインキュベート時間に依存して増大した。一方、予め培地中でプレインキュベートしたFlu-Abetaはほとんど細胞に結合しなかったことから、Flu-Abetaの蓄積は細胞膜上で起こったことが明らかとなった。Flu-Abetaが高度に蓄積した細胞はエチジウムホモダイマーで染色され死滅していた。また、メチルbetaシクロデキストリンで前処理してコレステロールを除去するとGM1-rich領域は消失し、Flu-Abetaの蓄積は抑制された。以上のように、リポソーム膜を用いた研究で観測された現象が、細胞レベルでも確認され、我々の仮説が指示された。

ア ル ツ ハ イ マ 発 ー disease syndrome の first Duan Jie は soluble ア ミ ロ イ ド beta protein (Abeta) の toxic type condensate collective へ の variations in と god 経 cells へ の shen the で あ り, こ の process の molecular institutions の interpret は, this disease の to prevention, treatment の open 発 に と っ て き わ め て important で あ る. I 々 は, membrane lipid ラ の フ ト に お い て, コ レ ス テ ロ ー ル dependent に form さ れ る ガ ン グ リ オ シ ド の ク ラ ス タ ー を soluble Abeta が know し て し, agglutination nucleus と な る ガ ン グ リ オ シ ド combination type Abeta が form さ れ る と の 仮 said を, リ ポ ソ ー ム membrane を with い た be 験 results を も と に made て て い る. This year は フ ル オ レ セ イ ン ラ ベ ル Abeta - (1-40) (Flu - Abeta) を い, PC12 cells で の agglutination process を total focus レ ー ザ ー 顕 micromirror で tracing し た. The research funds for this study で purchased た frozen preservation containers に for the preservation of <s:1> た. GM1ガ グリ グリ シドを get to know するAlexa Fluoro647 logo コ レ ラ ト キ シ ン B サ ブ ユ ニ ッ ト で strong く dyeing さ れ る membrane の field (this - rich areas) に Flu - Abeta は accumulation し, volume は Flu - Abeta concentration と イ ン キ ュ ベ ー に ト time dependent し て raised large し た. In the side, to the め petty で プ レ イ ン キ ュ ベ ー ト し た Flu - Abeta は ほ と ん に ど cells combined with し な か っ た こ と か ら, Flu - Abeta の accumulation は membrane で up こ っ た こ と が Ming ら か と な っ た. Flu-Abetaが height に accumulation of <s:1> た cells エチジウムホモダ エチジウムホモダ で で で staining され inactivation of て て た た た た た た た た た た た た た ま た, メ チ ル beta シ ク ロ デ キ ス ト リ ン で 処 before Richard し て コ レ ス テ ロ ー ル を remove す る と は disappear し, Flu - this - rich field Abeta の accumulation は inhibit さ れ た. Above の よ う に, リ ポ ソ ー を ム membrane with い た research で 観 measuring さ れ が た phenomenon, cell レ ベ ル で も confirm さ れ, I 々 の 仮 said が instructions さ れ た.

项目成果

A seeed for Alzheimer amyloid in the brain

大脑中阿尔茨海默淀粉样蛋白的种子

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Neurosci. 24・20
• 作者: Oinuma I;Katoh H;Negishi M;Uemura K. et al.;Yamashita et al.;Tomonaga;Kihara T et al.;Okamoto et al.;Shiozaki A et al.;Kanki R et al.;Sawada H et al.;Kohno R et al.;M.Wakabayashi et al.;H.Hayashi et al.
• 通讯作者: H.Hayashi et al.

GM1 ganglioside-mediated accumulation of amyloid beta-protein on cell memebranes

GM1 神经节苷脂介导的淀粉样β蛋白在细胞膜上的积累

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 328・4
• 作者: Oinuma I;Katoh H;Negishi M;Uemura K. et al.;Yamashita et al.;Tomonaga;Kihara T et al.;Okamoto et al.;Shiozaki A et al.;Kanki R et al.;Sawada H et al.;Kohno R et al.;M.Wakabayashi et al.
• 通讯作者: M.Wakabayashi et al.