Molecular pathogenesis of brain malformations in de novo postzygotic mutations in the brain

大脑从头合子突变中大脑畸形的分子发病机制

• 批准号: 21H02883
• 负责人: 伊東 恭子
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02883/
• 关键词: 胎児医学; 体細胞モザイク; 脳形成異常; 脳オルガノイド; 子宮内電気穿孔法; 神経幹・前駆細胞

pmCherry-N1ベクターを骨格として、プロモーターをpCMVからpCAGに変更、HA-tag、かつ細胞膜移行シグナルCaaXを入れたベクターに、AKT1 E17K、PIK3CA E545Kを挿入し、変異遺伝子とWTのベクターを作製した（pCAG-AKT1-HAtag-P2A-mCherry, pCAG- AKT1-HAtag-P2A-mCherry-CaaX、pCAG-AKT1E17K-HAtag-P2A-mCherry, pCAG- AKT1 E17K -HAtag-P2A-mCherry-CaaX、pCAG-PIK3CA-HAtag-P2A-mCherry, pCAG- PIK3CA -HAtag-P2A-mCherry-CaaX、pCAG-PIK3CAE545K-HAtag-P2A-mCherry, pCAG- PIK3CAE545K -HAtag-P2A-mCherry-CaaX）。胎齢13.5日にin utero electroporationにより、上記プラスミドを胎仔脳脳室帯神経幹・前駆細胞に導入後、胎齢15.5日、16.5日、17.7日の胎仔脳を組織解析した。変異遺伝子（AKT1E17K）導入細胞は、PIK3-AKT-mTORシグナルが過活性化されており、幼弱な神経細胞はサブプレートから中間帯に結節状に残存し、皮質板への遊走が抑制されていた。これらの神経細胞では、皮質神経細胞の層マーカとなる複数の転写因子群の発現がかく乱されていた。今後、分化・遊走障害の分子メカニズムを明らかにしていく予定である。

PmCherry - N1 ベ ク タ ー を bone と し て, プ ロ モ ー タ ー を pCMV か ら pCAG に - more, HA - tag, か つ transitional cell membrane シ グ ナ ル CaaX を into れ た ベ ク タ ー に, AKT1 E17K, PIK3CA E545Kを insert <s:1>, variant 伝 sub-product とWT ベ タ タ を を to make た (pCAG-AKT1-HAtag-P2A-mCherry) pCAG-AKT1-HAtag-P2A-mCherry-CaaX, pCAG-AKT1E17K-HAtag-P2A-mCherry Pcag-akt1-e17k-hatag-p2a-mcherry-caax, pCAG-PIK3CA-HAtag-P2A-mCherry (pCAG-PIK3CA-HAtag-P2A-mCherry-CaaX, pCAG-PIK3CAE545K-HAtag-P2A-mCherry, PCAG-PIK3CAE545K-HATag-P2A-MCherry-CAAX). Tire 齢 に 13.5 days in utero electroporation に よ り, written プ ラ ス ミ ド を tire tsai 脳 脳 chamber 帯 god 経 dry, before に 駆 cells after import, tire 齢 15.5 days and 16.5 days, 17.7 days の tire tsai 脳 を organization analytical し た. - different heritage 伝 は (AKT1E17K) into cells, PIK3 AKT - mTOR シ グ ナ ル が had activeness さ れ て お り, indecisive な god 経 cell は サ ブ プ レ ー ト か ら middle 帯 に nodular に residual し, cortical plate へ の wander が inhibit さ れ て い た. The <s:1> れら <s:1> nervous cells で た, the <s:1> layer of cortical nervous cells <s:1> <s:1> <s:1> カとなる plural <s:1> 転 writing factor groups <e:1> are present が く く く disorder されて た た た た. In the future, the molecules of the division and migration obstacles メカニズムを, ら に, に, て, く will be determined to である.