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体細胞モザイク誘導系を用いた脳内光受容体の同定

使用体细胞镶嵌诱导系统识别大脑中的光感受器

基本信息

批准号：
09740630
负责人：
松本顕
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度はショウジョウバエ脳内に存在する概日リズム同調に関与する光受容器の同定を目指し、植物やマウスで見つかっている、cryptochrome-likeなタンパクをコードする遺伝子のPCRによる検索を行い、複数の増幅断片を得た。この断片の解析を進めていたところ、京都大学の藤堂助教授のグループが、同様の手法ですでにショウジョウバエcryptochrome遺伝子(以下cryと略)のcDNA全長のクローニングに成功しているとの情報を得て、共同研究を開始した。cryは唾液線染色体の92A1-2にマップされ、そのmRNAはembryoの時期を除き、発生の全段階を通じて発現していた。また、成虫では頭部でも体幹でも発現が見られた(以上は藤堂助教授のグループによってすでに得られていたデータである)。概日リズムに関与する遺伝子はそのmRNAや蛋白質が量的に概日変化を示すことが知られている。そこで、頭部でのcry mRNAの概日変動をRNaseProtection Assay法によってモニターした。明暗条件では昼にピークを持つ明瞭な概日振動が観察された。恒暗条件では、1日目には概日振動が観察されたが、以降は急速な振動の減衰がみられた。無周期突然変異のper^<01>やtim^<01>では、明暗条件下であってもcry mRNAには変動が見られなかった。このことから、cry mRNAの転写は概日時計の支配を受けることが推察される。次に、cryの概日系光受容への関与を調べるために、cryの異所的強制発現系を用いた実験を行った。cryをcytoplosmic actinのプロモーターによって強く発現させた後、光パルスに対する位相反応を調べた。その結果、cry強制発現系統では主観的夜の前半に起こる光パルスによる位相後退が著しく阻害されることがわかった。このことから、cryが概日時計の光受容に関与することが示唆された。これらの結果は論文にまとめられ、Genes to Cellsに掲載予定である。

In the last year of the year, there is a possibility that the target is the same as that of the light receptacle, the plant is the same as the light receptacle, the plant is the same as the light receptacle, the plant is in the same direction, the plant is in the same direction, the cryptochrome-like is in the same direction, the plant is in the same direction as the light receptacle The whole length of the cDNA (the following cry strategy) was successfully analyzed, and the joint research began. The cry salivary line chromosomes 92A1-2 and mRNA embryo were deleted in time, and the whole DNA was detected by RT-PCR. The body of the adult and adult worms shows that they are suffering from the disease (the above). The "approximate daily" of the amount of mRNA protein in general and that in the first place shows that you are not aware of it. The RNaseProtection Assay method will be carried out on the general day of the cry mRNA meeting of the Ministry of Health and the Ministry. In the light and dark conditions, the daylight and dark conditions are clear and clear. Under constant dark conditions, it is possible to observe the weather on the first day of the day, so as to reduce the rapid vibration. All of a sudden, the cycle will cause a sudden change in the cycle, and the cry mRNA will suddenly change in the light and dark condition, and the lt;01> will not be affected. The approximate daily time of the data collected and written by cry mRNA will be subject to the monitoring and inspection of the users. In general, the system of light tolerance in cry system is used in the system of light tolerance system and the system of cry system. The position of the light source is opposite to that of the cry. After the signal is strongly detected, the position is opposite. According to the results, cry forced the current system to start the first half of the night in the first half of the night, and then reverse the phase to prevent the damage. The general daily time of the light tolerance test and the cry test show that they are instigated. The results show that the text is correct, and the Genes to Cells is predetermined.