Development of therapeutically active nanomaterials: lipoprotein structure/function-based therapeutic strategies to treat intractable ocular diseases

点击翻译按钮获取中文摘要

昨年度、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）に含まれる脂質結合タンパク質ａｐｏＡ－Ｉの１０個の両親媒性αヘリックスの中から、コール酸ナトリウム法によって、リン脂質と反応してＨＤＬ様粒子を形成するαヘリックス領域のペプチド（ペプチドＸ）を見出した。今年度、Ｘペプチドが形成するＨＤＬ様粒子の機能解析を行うために、Ｘペプチドの大量合成を行い、４０ｍｇ程度を得た（純度＞９５％）。既報で用いられたＨＤＬ様粒子作製法（リポソーム法）において、ポジコンとして用いたＣ末端ペプチド（ペプチド１０）では形成が見られ、ペプチドＸはＨＤＬ様粒子では見られないことを確認した。ゼブラフィッシュ幼魚を用いる血管内皮接着性ｉｎ　ｖｉｖｏ評価システムを開発することに成功した。蛍光脂質を含む３種類のＨＤＬ改変体（多様な細胞親和性を示す）およびリポソーム、ポリエチレングリコール修飾リポソームをゼブラフィッシュ幼魚のキュビエ管（静脈に相当）に注射し、共焦点蛍光顕微鏡および実体蛍光顕微鏡の両者でｉｎ　ｖｉｖｏ蛍光イメージングを行った。前者では主に血液由来蛍光を検出し、後者では血液と血管両方からの蛍光を検出した。これらのデータの差は、血管内皮に接着した成分からの蛍光に相当する。こうして得られた５サンプルのデータは、同蛍光ラベルサンプルをマウス尾静脈内投与後に採取された大動脈血管内皮の表面からの蛍光データと良く相関した（Ｒ２＞０．９）。すなわち静脈内投与されたＨＤＬ改変体およびリポソームのマウス血管内皮接着性は、ゼブラフィッシュを用いて推測できることが明らかになった。さらにゼブラフィッシュ幼魚における上記５サンプルの血中滞留性は、マウスにおけるそれと良く相関することもわかった（Ｒ２＞０．９）。従って血中滞留性評価において、ゼブラフィッシュ幼魚はマウスを代替できることが明らかになった。