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EGFR変異肺癌における小細胞肺癌への形質転換によるTKI耐性獲得機序の検索

寻找EGFR突变肺癌转化为小细胞肺癌获得TKI耐药的机制

基本信息

批准号：
19K16785
负责人：
古賀教将
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kindai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

EGFR遺伝子変異陽性の肺癌細胞株であるPC9(Exon 19 deletion)、HCC827(Exon 19 deletion)、H3255(Exon 21 L858R)の3株において、CRISPR/Cas9を用いてTP53遺伝子とRB1遺伝子のノックアウト株を作成し、これらに対して薬剤慢性曝露によってEGFR-TKI(エルロチニブ、アファチニブ、オシメルチニブ)耐性株を計15株樹立した。これらEGFR-TKI耐性株について神経内分泌マーカー(Synaptophysin, Chromogranin, NCAM1)の発現を免疫染色とqPCRで検証し、小細胞肺癌転換の有無を検討した。TP53/RB1ノックアウト株では神経内分泌マーカーの発現に認められなかった。EGFR-TKI耐性株のうち、アファチニブ耐性、オシメルチニブ耐性を獲得したPC9クローンでNCAM1の発現の上昇を認めた。その他のEGFR-TKI耐性株では形態変化や神経内分泌マーカーの明らかな上昇は認めなかった。正常気管支上皮細胞株に遺伝子操作を加えて神経内分泌細胞に転化させた既報においては(Park JW, et al. Science 2018)、in vivo (異種移植)による腫瘍形成後に、組織形態ならびに神経内分泌細胞マーカー発現の変化が検証されていたため、本研究においてもヌードマウスに親株・TP53/RB1 ダブルノックアウト株・EGFR-TKI耐性株、計14株を異種移植し、生着・増大したxenograft 14株(コントロールを含む)を切除し、FFPE作成・核酸抽出を行なった。現在これらxenograftの神経内分泌マーカーを検証中である。

EGFR gene mutation-positive lung cancer cell lines Hikaru PC9 (Exon 19 deletion), HCC827 (Exon 19 deletion), H3255 (Exon 21 L858R)の3 strains of において、CRISPR/Cas9をproduced with いてTP53 伝子とRB1 人伝子のノックアウトををらに対して薬剤Chronic exposure EGFR-TKI A total of 15 resistant strains of ブ, アファチニブ, オシメルチニブ) were established. Synaptophysin, Chromogranin, NCAM1) has been confirmed by immunostaining and qPCR, and the presence or absence of small cell lung cancer has been determined. TP53/RB1 ノックアウト strain では神経Endocrine マーカーの発出账秒到められなかった. EGFR-TKI resistant strains such as EGFR-TKI resistant strains, EGFR-TKI resistant strains, and EGFR-TKI resistant strains have obtained PC9 and NCAM1. The EGFR-TKI resistant strain has a morphological change and a morphological change in the EGFR-TKI resistance strain. The normal vascular branch epithelial cell line was manipulated and the endocrine cells were modified and reported in vivo (Park JW, et al. Science 2018), in vivo (Xenotransplantation) After the formation of tumor, the appearance of tissue morphology and endocrine cells. Changhua 検证されていたため, this research においてもヌードマウスに parent strain・TP53/RB1 ダブルノックアウト strain・EGFR-TKI resistant strain, 14 strains in total, xenograft, growth・enlargement xenograft 14 strains (コントロールをむ) were cut out, FFPE was made, and nucleic acid was extracted. Now the xenograft の神経Endocrine マーカーを検证中である.