試験管内転写tRNAによる蛋白質合成系を用いたtRNA修飾塩基の機能解析
使用体外转录的基于 tRNA 的蛋白质合成系统对 tRNA 修饰碱基进行功能分析
基本信息
- 批准号:19J12955
- 负责人:
- 金额:$ 1.09万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2019
- 资助国家:日本
- 起止时间:2019-04-25 至 2021-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
tRNAはさまざまな修飾塩基を持ち、それらの手助けを受けてその機能を効率的に果たしている。本研究では、修飾塩基を一切持たない試験管内転写tRNAによるタンパク質合成系を基に、特定のtRNAに単一の修飾塩基を導入し、その機能動態を解析することでこれまで明らかでなかった修飾の機能を明らかにすることを目指した。本年度は、昨年度修飾導入系の確立が行えなったs2Uの導入条件検討および導入したtRNAの機能評価を行った。まず、Sulfur-relay systemを構成する5つの酵素群とIscS、MnmAの7つの酵素群からなる修飾導入系を構築した。その結果、Lys-tRNA(UUU)ではs2Uはアミノアシレーション効率に大きく影響を及ぼさないが、Glu-tRNA(UUC)ではs2Uの導入によってAcceptanceが10倍程度まで向上することを見出した。また、詳細にデコーディング過程が解析できるペプチド合成評価系の構築を試みた。従前の系は、アミノアシル化効率の低いIle-tRNA(GAU)を大量に必要とし、Ile-tRNAが律速である定性的なものであった。そこで、ペプチド配列の検討を行い、Ileを用いず安定的にTCA沈殿によって定量できる合成系を構築した。この系では評価しないコドンに対応するtRNA必要量が従来の1/10以下で律速ではなくなり、より詳細な解析が可能であると期待された。一方で、評価したいtRNAに対応するアミノ酸種によって沈殿効率が変化してしまう課題も見出され、その検討も進めた。一方で、2020年度上半期で終了した本研究はCoVID-19流行の影響を大きく受けた。放射線管理区域の閉鎖により第一四半期は全く実験が行えず、第二四半期に進展があったものの構築した系を用いた評価は積み残しになってしまった。今後、評価を進め、修飾塩基の機能が定量的に理解されることが期待される。
The tRNA is modified by the amino acid sequence, and the amino acid sequence is modified by the amino acid sequence, and the amino acid sequence is modified by the amino acid sequence. In this study, all the modified bases were introduced into the plasmid synthesis system, and the functional dynamics of the modified bases were analyzed. This year, the introduction of modified tRNA was established and the introduction of tRNA was evaluated 5 enzyme groups, IscS, MnmA and 7 enzyme groups were constructed from the Sulfur-relay system. As a result, Lys-tRNA(UUU) has a large impact on the efficiency of s2U and Glu-tRNA(UUC) has a 10-fold Acceptance of s2U. The analysis and construction of the synthetic evaluation system are carried out in detail. The former is a low level of Ile-tRNA(GAU), which is essential to the success of the process. The synthesis system of TCA was constructed in the process of analysis and application. This is the first time that we've had a chance to talk to each other. The problem is that we have to find a way to improve the quality of our products. The first half of 2020 is over. This study is about the impact of CoVID-19 epidemic. The first half of the radiation management area was completely completed, and the second half of the radiation management area was completed. In the future, we look forward to the advancement of evaluation and the quantitative understanding of the functions of modification bases.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
被修飾試験管内転写tRNAによるタンパク質合成系の構築
使用修饰的体外转录tRNA构建蛋白质合成系统
- DOI:
- 发表时间:2019
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Hibi Keita;Amikura Kazuaki;Sugiura Naoki;Masuda Keiko;Ohno Satoshi;Yokogawa Takashi;Ueda Takuya;Shimizu Yoshihiro;日比 敬太
- 通讯作者:日比 敬太
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