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発がんシグナル誘導性複製ストレスへの応答機構を標的とする治療開発

针对致癌信号诱导的复制应激的反应机制的治疗开发

基本信息

批准号：
19K07772
负责人：
山下孝之
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

がん遺伝子の活性化はDNA損傷を介してゲノム不安定性を促進する一方、細胞の老化・死を引き起こす。したがって、この仕組みの解明は発がん過程の理解だけでなく治療の開発にも重要である。ゲノムには、一本鎖DNAがG4と呼ばれる二次構造を形成しうるモチーフが37万以上あると推定される。グアニン四重鎖構造(G4)はDNA複製に対する障壁となるが、がん遺伝子活性化が誘導するDNA損傷における役割は明らかではない。本研究では、がん遺伝子誘導性DNA損傷におけるG4の役割を解明することを目的として、複数のヒト細胞株(U2OS, Tert-RPE1, HeLaなど)にER-Myc融合遺伝子を安定的に発現するクローンを作成した。これらの細胞株を4OHTによって処理するとMycが活性化され、DNA損傷を伴う細胞周期の停止や細胞死の誘導が観察された。G4を特異的に認識するモノクローナル抗体(BG4)を用いて核内DNAのG4構造を染色したところ、いずれの細胞においても4OHT処理によってG4シグナルの増加が見られた。また、一部の細胞において、4OHT処理細胞においてG4安定化剤pyridostatin(PDS)とPhen-DC3に対する細胞毒性感受性が増加した。興味深いことに、PDSやPhen-DC3はPCNAユビキチン化とポリメラーゼetaのフォーカス形成を誘導した。これらの結果は、PDSが複製ストレスを誘導することを示唆する。そこで、ポリメラーゼetaの発現をsiRNAによって抑制したところ、PDSやPhen-DC3によるDNA損傷と細胞死を相乗的に促進した。以上より、Myc活性化による複製ストレスが部分的にDNA損傷の発生に関与しており、G4安定化剤とポリメラーゼeta阻害がMyc活性化細胞において合成致死作用を示すことが示唆された。

The activation of the child, the activation of the DNA, the introduction of restlessness, the qualitative promotion of uneasiness, the aging of the cells, the death of the cells, and the aging of the cells. The staff members and staff members will explain the process and understand the important events in the process of medical treatment and management. One copy of DNA G4 calls for a second copy of the book to form a book of more than 370000 presumption. In order to make (G4) DNA copy, the barrier will be activated, and the DNA will be activated to make sure that you are in service. In this study, we found that the cells (U2OS, Tert-RPE1, HeLa) were fused with the stable cells (U2OS, Tert-RPE1, G4). In this study, we found that the cells (U2OS, Tert-RPE1, G4) were fused with the stable cells. The cell lines were divided into two groups: 4OHT cell line, Myc cell line, Myc cell line, DNA cell line, cell cycle cell line, cell death cell line, cell cycle cell line and cell cycle cell line. G4 specific antibody antibody (BG4) was stained with intranuclear DNA G4, which was stained with G4. The cells were stained with G4, and the cells were stained with 4OHT. 4OHT, 4OHT, G4, pyridostatin (PDS), Phen-DC3, cytotoxicity, cytotoxicity and sensitivity. The flavor is deep, the DC3 is PCNA, and the flavor is changed. The taste is deep, the eta is deep, and the guidebook is formed. Please check the results and PDS copy to show that you are instigated. The promotion of siRNA inhibition, DNA-DC3 inhibition, DNA cell death and cell death phase was observed. The above, Myc activation, DNA activation, replication and antisepsis, G4 stabilization, eta block, Myc activation, cell synthesis, lethality, instillation and instillation.