二種類の骨髄由来肝臓修復細胞による効率的な肝臓再生療法の開発

使用两种骨髓源性肝修复细胞开发有效的肝再生疗法

• 批准号: 18K08005
• 负责人: 山本 直樹
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K08005/
• 关键词: 再生医療; 間葉系幹細胞; 肝線維化; 脂肪性肝疾患; 電子顕微鏡; アデノシンデアミナーゼ; 代謝性脂肪性肝疾患; 骨髄細胞; 肝脂肪化; 四塩化炭素; EpCAM; CXCR4; 培養骨髄細胞; 肝硬変; Adenylate kinase; GFP/CCl4モデル

GFPTGマウス全骨髄細胞からMSCを分離(Veritas Easy step kit ST19771を使用)継代し培養GFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を確立し、持続肝障害(CCL4)モデルにPassage1～4までのそれぞれの培養細胞群を尾静脈から投与した場合と脾臓投与した場合で肝組織でのSirius Red染色での肝線維化改善効果の比較検討を行った。結果として脾臓投与の方が肝線維化抑制効果を認めた。MSC投与後の肝組織を浮遊切片法による高感度免疫電顕法とFEI社製の透過型電子顕微鏡Tecnai12BTと走査型電子顕微鏡Qunta3D FEG DualBeamシステムを用いて二種類の骨髄由来肝臓修復細胞である核N/C比の高い小型細胞と類円形の大型細胞の形態学的変化を解析、トモグラフィーによる微細構造と３Ｄ立体構造構築による解析で核N/C比の高いEpCAM陽性細胞とCXCR4陽性細胞と類円形のMMP9陽性細胞の形態と特徴解析を行った。また我々が開発した肝脂肪化悪化モデル(AK3KOマウス)にGAN特殊飼料投与＋CCL4による肝線維化合併モデルを作成し、肝組織線維化・脂肪化環境下で肝細胞や星細胞等の変化を電子顕微鏡等で評価を開始し、このモデルにMSCを脾臓投与し、線維化・脂肪化抑制効果の評価と動態解析を行った。また新規開発した代謝系異常のAK5KOマウスを作成して、GFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を投与し、肝臓内での投与した細胞の動態と機能解析を行った。また新規開発した代謝系異常のAK3KOマウスとAK5KOマウスにGAN食投与を開始してMAFLDモデルを作成し、そのモデルにGFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を脾臓投与あるいは静脈投与して肝臓内での投与した細胞の動態と肝線維化と脂肪化に対する効果解析を行った。

GFPTG cells were isolated from whole bone marrow cells (Veritas Easy step kit ST19771 was used) and cultured to GFP-positive bone marrow derived from mesenchymal cells (MSC). The results of the establishment and maintenance of liver injury (CCL4) were compared between the cultured cell populations from tail vein injection and spleen injection. The results showed that the liver maintenance inhibition effect was recognized by the method of spleen injection and prescription. After MSC injection, liver tissue was examined by high sensitivity immunoelectrophotography and FEI transmission electron microscope Tecnai12BT and scanning electron microscope Qunta3D FEG DualBeam. Morphological changes of two types of bone tissue derived from liver repair cells were analyzed. Analysis of morphology and characteristics of EpCAM positive cells, CXCR4 positive cells and MMP9 positive cells with high nuclear N/C ratio. The development of liver fatty liver disease (AK3 KO), the preparation of liver maintenance and combination of GAN special feed administration and +CCL4, liver tissue maintenance, the transformation of hepatocytes and astrocytes in fatty environment, the evaluation of electron microscopy, etc., the start of the evaluation, the evaluation and dynamic analysis of the effect of MSC on liver fatty liver disease, linear maintenance and fatty inhibition. The new discovery of AK5 KO in metabolic system abnormality, GFP positive bone marrow derived from mesenchymal cells (MSC), liver cells and cell dynamics and functional analysis The results were analyzed for AK3 KO, AK5 KO, GAN, MAFLD, and GFP-positive bone marrow derived from mesenchymal cells (MSC), spleen, vein, and liver.

项目成果

医師主導治験「自己完結型肝硬変再生療法」の開発とNASH肝硬変への有効性評価

研究者发起的临床试验“自给式肝硬化再生疗法”的开发及NASH肝硬化疗效评价

• 发表时间: 2022
• 作者: 高見太郎;松本俊彦;大田久美江;児玉雅季;藤村瑠意;小島奈緒美;山本直樹;坂井田功
• 通讯作者: 坂井田功

Arterial infusion of cultured autologous bone marrow mesenchymal stem cells has a stronger therapeutic effect on liver cirrhosis in our established canine model

在我们建立的犬模型中，动脉输注培养的自体骨髓间充质干细胞对肝硬化有更强的治疗作用

• 发表时间: 2018
• 作者: Ryo Sasaki;Tatsuro Nishimura;Taro Takami;Yuki Aibe;Takashi Matsuda;Toshihiko;Matsumoto;Koichi Fujisawa;Naoki Yamamoto;Isao Sakaida
• 通讯作者: Isao Sakaida

NUPR1 acts as a pro-survival factor in human bone marrow-derived mesenchymal stem cells and is induced by the hypoxia mimetic reagent deferoxamine

• DOI: 10.3164/jcbn.18-112
• 发表时间: 2019-03
• 期刊: Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition
• 影响因子: 2.4
• 作者: K. Matsunaga;K. Fujisawa;T. Takami;G. Burganova;Nanami Sasai;Toshihiko Matsumoto;N. Yamamoto;I. Sakaida

培養自己骨髄間葉系幹細胞投与療法に対するmicroRNAを用いた補助療法の開発

使用microRNA进行培养的自体骨髓间充质干细胞给药治疗的辅助治疗的开发

• 发表时间: 2021
• 作者: 原 和冴;松本 俊彦;藤澤 浩一;山本 直樹;高見 太郎
• 通讯作者: 高見 太郎

高脂肪食投与によるメダカ脂肪肝の代謝変化とTransparent(透明)メダカを用いたUltrasoundによる非侵襲的脂肪肝評価

高脂肪饮食导致青鳉脂肪肝的代谢变化以及使用透明青鳉超声进行非侵入性脂肪肝评估

• 发表时间: 2018
• 作者: 藤澤浩一;高見太郎;福井悠美;松本俊彦;山本直樹,坂井田功
• 通讯作者: 山本直樹,坂井田功