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単純ヘルペスウイルス1型におけるインターフェロン抑制機構の構造基盤

1型单纯疱疹病毒干扰素抑制机制的结构基础

基本信息

批准号：
21K14787
负责人：
小林淳
金额：
$ 3万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ヘルペスウイルス感染症の治療には一定の割合で耐性ウイルスが出現し、新たな作用機序の治療薬が求められている。また、単純ヘルペスウイルス1型(HSV-1)を改変することで、腫瘍細胞のみを破壊するウイルス療法薬としてデリタクト注が2021年に承認された。次世代のヘルペスウイルス感染症治療薬/ウイルス療法薬を合理的に開発するため、本研究ではHSV-1の増殖機構をタンパク質構造レベルで明らかにすることを目的とし、HSV-1の主要な病原性因子であるγ34.5とγ34.5が結合するヒトタンパク質の複合体立体構造解析を行っている。γ34.5を大量に調製するため、昨年度までは大腸菌を宿主としてγ34.5単独を発現させてきたが、発現量が低かった。そのため、今年度はmaltose-binding protein (MBP) との融合タンパク質として発現量の改善を試みたが、発現量は依然として低いままであった。また、コムギ無細胞合成系を用いた発現検討も行ったが、発現量は低く、結晶化できる量の精製タンパク質は得られなかった。これらの結果から、γ34.5全長の発現はあきらめ、ヒトタンパク質と相互作用すると考えられる部分のみをペプチド合成した。次いで、γ34.5が相互作用するヒトタンパク質であるProtein phosphatase 1 α subunit (PP1α) の発現・精製を行った。大腸菌による発現と精製に成功し、PP1α単独ではあるが結晶も得られた。さらに、buffer条件を検討し、精製したPP1αとγ34.5ペプチドを混合してゲル濾過カラムクロマトグラフィーにより精製し、複合体を形成する条件を確立した。

In the treatment of infectious disease, it is necessary to treat the disease with patience, and the new mechanism of action should be used to treat the disease. Please note that in 2021, please do not know what to do. Please do not know what to do. Please note that in 2021, you will not be able to do anything in the future. In this study, the HSV-1 colonization mechanism was used to analyze the main pathogenic factors (γ 34.5, γ 34.5) and the combination of the main pathogenic factors (γ 34.5, γ 34.5). In this study, the main pathogenic factors of the disease, the main pathogenic factors, the combination of the main pathogenic factors, γ 34. 5 and γ 34. 5, were analyzed and analyzed. Gamma 34.5, a large number of bacteria, and last year's host, gamma 34.5, were found to be severe and low in quantity. This year's maltose-binding protein (MBP) fusion will improve the quality of the market, while the volume will remain low. In the system of cell synthesis, the results show that the system is effective, the quantity is low, and the crystallization is accurate. The results show that the whole length of γ 34.5 is effective, and the interaction between each other is very important. The interaction between γ 34.5 and Protein phosphatase 1 α subunit (PP1 α) was induced by the interaction of γ 34.5 and γ 34.5. Agrobacterium tumefaciens showed that the results were successful, and the results of PP1 α alone were successful. The combination of PP1 α, γ 34. 5, buffer, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5, γ 34. 5.