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昆虫脂肪体幹細胞の連続培養及びオルガノイド形成技術の開発

昆虫脂肪体干细胞连续培养及类器官形成技术开发

基本信息

批准号：
22K05677
负责人：
小林淳
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05677/
关键词：
昆虫培養細胞スフェロイドオルガノイド脂肪体幹細胞

项目摘要

１. 脂肪体の特性を有する細胞集団の構成細胞の分離培養と特性解析カイコ胚子の初代培養から得られた脂肪体の特性を有する増殖分化細胞集団BoMo-Siam BのRNA-seq解析により，脂肪体で特異的に発現する体液タンパク質（promoting protein，low molecular 30 kDa lipoprotein PBMHP-6 precursorなど）や生体防御タンパク質（attacin precursorなど）の遺伝子が，卵巣由来のBmN4細胞よりも顕著に多く発現していることが確認され，分離培養やスフェロイドあるいはオルガノイド形成に伴う遺伝子発現特性変化を評価するための比較対照基準が得られた。また，BoMo-Siam Bから小型の浮遊性細胞の分離培養に成功し，凝集体（スフェロイド）形成能力とBmNPV感受性を有することを明らかにした。さらに，細胞内に形成される顆粒は，蛍光色素LipiDyeIIを取り込んで明瞭な蛍光を発することから，脂肪を蓄積していることが示唆された。２. 脂肪体オルガノイド形成技術の開発と特性解析BoMo-Siam Bのスフェロイドを5 μmセルストレイナーを用いて除去し，ほぼシングルセル状態からのスフェロイド形成を試みたところ，徐々に細胞の集塊が形成されるものの，細胞の初期密度を増やしてもスフェロイド形成効率に顕著な改善は認められなかった．さらに，哺乳類のオルガノイド形成に用いられているPamCellおよびVitro Gelの2種類の3次元培養法を用いて，BoMo-Siam Bのシングルセル状態からのスフェロイド形成を試みたが，改善は認められなかった。

1. Isolation, culture and characterization of the constituent cells of the adipocyte population. Analysis of RNA-seq of the differentiated cell population BoMo-Siam B. Specific development of the adipocyte.(promoting protein, low molecular 30 kDa lipoprotein PBMHP-6 precursor)(attacin precursor), BmN4 cells from which the egg originated, and many of them were identified. Isolation, culture, and formation were evaluated. Comparison criteria were obtained. The isolation and culture of BoMo-Siam B cells were successful, and the ability to form aggregates and BmNPV susceptibility was demonstrated. In addition, the formation of intracellular particles, the pigment LipidII, can be used to detect light emission and fat accumulation. 2. The development and characteristics analysis of fat body formation technology BoMo-Siam B has a 5 μm diameter and a 5 μ m diameter. In addition, two kinds of three-dimensional culture methods of PamCell and Vitro Gel were used in the formation of mammals, and BoMo-Siam B was used to improve the formation of mammals.