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大腸菌由来7α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の動的X線結晶構造解析

大肠杆菌7α-羟基类固醇脱氢酶的动态X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
09780600
负责人：
野中孝昌
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ケージ化グリコケノデオキシコール酸(caged GCDCA)の溶液に7α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の結晶を一昼夜浸した後、取り出してキャピラリーに封入し、高エネルギー加速器研究機構所放射光研究施設のビームライン18Bにおいて光を当てない状態でラウエ回折強度データを収集した。1フレームにつき20ミリ秒の露出とし、10ﾟ(スピンドル軸の角度)間隔で合計6フレームの撮影を行った。キャピラリーをゴニオメータヘッドに取り付けたまま、照明を点灯し、1時間後に再度、同じ条件でラウエ回折強度データを収集した。反応の前後の2つのデーターセットに対し、結晶構造解析を行い、酵素反応の前後での構造の比較を行った。400×800mm^2の大型イメージングプレートを用いて収集したラウエ回折強度データは、プログラムLAUEGENを用いて処理を行った。積分強度の波長に対する規格化を行った後、すべてのフレームのデータをマージして一つのデータセットとした。プログラムREFMACを用いて酵素反応の前後の立体構造の精密化を行い、両者の比較を行った。両者とも差フーリエ図上にグリコケノデオキシコール酸、あるいはその反応産物に対応する電子密度分布を観測することはできなかった。そもそも、ケージ化グリコケノデオキシコール酸が7α-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の結晶に導入されていなかった可能性がある。

After the crystallization of 7α-hydroxy-4-deoxy-D-dehydro-3-acetic acid (caged GCDCA) in a solution was immersed day and night, it was extracted from the solution and encapsulated in the solution. The radiation intensity of the solution was measured by the radiation intensity measurement system of the radiation accelerator research institute. 1 ° C. 20 ° C. Exposure, 10 ° C.(angle of axis). Total 6 ° C. The light is turned on, and the light is turned on again after 1 hour. The structure analysis of the enzyme before and after the enzyme reaction was carried out. 400×800mm^2 large screen layout, use in the collection, use in the collection. After normalization of the wavelength of the integral intensity, the wavelength of the integral intensity is normalized. The precision of the three-dimensional structure before and after the enzyme reaction is carried out in the middle and the comparison between the two. The electron density distribution of the reaction product was measured. The possibility of introducing 7α-deoxy-4-hydroxy-quinoline into the crystallization of 7α-deoxy-4-hydroxy-quinoline enzyme is very high.