ヒストンのアセチル化によるクロマチン構造を介した転写調節機構の解析

组蛋白乙酰化染色质结构介导的转录调控机制分析

• 批准号: 09780643
• 负责人: 青田 聖恵
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780643/
• 关键词: 転写; クロマチン; ヒストン; RNAポリメラーゼIII; ヌクレオソーム; SP6RNA; アフリカツメガエル; アセチル化

近年、多岐に渡る遺伝子の転写調節に共通して働く因子の中に、SWI/SNIF複合体のようにクロマチンの構造変化に関与するものや、p300/CBPあるいはRbp3pのようにヒストンのアセチル化および脱アセチル化の活性を有している因子が見つかってきた。これらにより遺伝子の転写因子からの研究とクロマチン構造からの研究がまさに交差し合うようになった。そこで、in vitroで転写活性とクロマチン構造を併せて解析することが可能なdinucleosomeの系を用いて以下の3点について研究に取り組んだ。1、ヒストンアセチル化の影響。アセチル化の程度の異なるヒストンをHeLa細胞から調整し、dinucleosomeを再構成して構造比較を5つの方法(2次元アクリルアミドゲルを用いたヌクレオソーム移動性解析、ヌクレアーゼ消化速度によるヌクレオソーム安定性解析、ヌクレオソームポジション解析、hydroxylradical footprinting、アガロースゲルを用いたリンカーヒストンの結合解析)で行ったが、アセチル化による構造の変化は何も検出されなかった。しかしXenopus oocyte核抽出液を用いたin vitroの転写では、アセチル化により5S遺伝の転写が活性化された。2、原子間力顕微鏡によるdinucleosomeの構造解析。ビオチン標識したオリゴプローブを用いてPCRでDNA断片を増幅し、non-RIのdinucleosomeを作製し、原子間力顕微鏡での解析を行った。3、より詳細に転写機構を解析するためのdinucleosomeのDNA鋳型。一方の5S遺伝子のプロモーターにSP6プロモーターを挿入し、2種類の異なるRNA polymeraseで転写される遺伝子を1つずつ含む新しいDNA鋳型を作製した。

In recent years, there are common factors in the regulation of multi-branch transition genes, structural changes in SWI/SNIF complexes, and factors in the regulation of Rbp 3p activity in SWI/SNIF complexes. The study of the structure of the structure The following three points are discussed in this paper. 1. The influence of the rapid development of tourism. HeLa cell restructuring, dinucleosome restructuring, structural comparison and analysis (2-D mobility analysis, digestion speed analysis, stability analysis, solution analysis, hydroxyl radical footprinting, and combination analysis) The structure of the structure. Xenopus oocyte nuclear extract is used in vitro to activate the 5S gene. 2. Structural analysis of dinucleosomes by atomic force microscopy. DNA fragment amplification, non-RI dinucleosome control, atomic force microscopy analysis 3. DNA typing of dinucleosome in detail. One of the 5S genes is the SP6 gene, and two different RNA polymerases are included in the gene. One of the 5S genes is the SP6 gene.

项目成果

Kiyoe Ura: "Histone acetylation:influence on transcription by RNA polymerase III,nucleosome mobility and positioning,and liker histone dependent transcriptional repression" EMBO J.16. 2096-2107 (1997)

Kiyoe Ura：“组蛋白乙酰化：RNA 聚合酶 III 对转录、核小体移动性和定位以及组蛋白依赖性转录抑制的影响”EMBO J.16。