权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

モデル dinucleosomeを用いたクロマチンを介した転写調節機構の解析

使用模型双核小体分析染色质介导的转录调控机制

基本信息

批准号：
09263216
负责人：
青田聖恵
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、転写調節因子の中に、SWI/SNIF複合体のようにクロマチンの構造変化に関与するものや、p300/CBPあるいはRbp3pのようにヒストンのアセチル化および脱アセチル化の活性を有している因子が見つかってきた。これらにより転写調節機構解明に向けた転写因子からの研究と遺伝子のクロマチン構造からの研究がまさに交差し合うようになった。そこで、in vitroでクロマチン鋳型を用いて転写因子と転写活性さらにクロマチン構造を併せて解析することが可能な2つのポジショニングしたヌクレオソームからなる極めて単純なクロマチン鋳型、dinucleosomeの系を改良し、以下の3点について、研究に取り組んだ。1、アセチル化の程度の異なるヒストンをHaLa細胞から調整し、dinucleosomeを再構成して構造比較を5つの方法で行った(2次元アクリルアミドゲルを用いたヌクレオソーム移動性解析、ヌクレアーゼ消化速度によるヌクレオソーム安定性解析,ヌクレオソームポジション解析、xydrozylradical footprinting、アガロースゲルを用いたリンカーヒストンの結合解析)。その結果アセチル化による構造の変化は何も検出されなかった。しかしXenopus oocyte核抽出液を用いたin vitroの転写では、アセチル化により5S遺伝子の転写が活性化された。2、ビオチン標識したオリゴプローブを用いてPCRでDNA断片を増幅し、non-RIのdinucleosomeを作製し、原子間力顕微鏡によるdinucleosomeの構造解析を行った。3、dinuclelsomeの一方の5S遺伝子のプロモーターにSP6のプロモーターを挿入して5S遺伝子のプロモーターを破壊し、2種類の異なるRNA polymeraseで転写される遺伝子を1つずつ含む新しいDNA鋳型を作製した。

In recent years, there have been some changes in the activity of the SWI/SNIF complex, such as the factors, the p300/CBP, the factors, the chemical factors. Please tell me that the organization is responsible for the study of the factors in the system. In this paper, we use the write factor to write the active data. This is the most important thing in this paper. In this paper, we use the write factor to write the active data. This is the best way to analyze the situation. The in vitro system is improved, and the following 3 points are available for the study. 1. In terms of the degree of mobility, the HaLa cells are adjusted, and the dinucleosome is then analyzed. The results show that the stability of the method is analyzed in terms of the rate of digestion. This is the combination of the analysis, the xydrozylradical footprinting, and the combination of the data analysis, the analysis. The results show that you need to know how to make a difference. The Xenopus oocyte nuclear extractive liquid was used to write the activating liquid in the in vitro. 2. The mark is known as the PCR fragment, the dinucleosome fragment, the dinucleosome fragment, the atomic force, the dinucleosome, and the parser. 3. On one side of the dinuclelsome, there is a link between the 5S and the SP6. There is a link between the 5S and the DNA. In the second category, there is a new DNA model.