嗅索形成への関与が期待される31C12抗原の発現解析および構造決定

有望参与嗅道形成的31C12抗原的表达分析和结构测定

• 批准号: 09780678
• 负责人: 平田 たつみ
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780678/
• 关键词: 神経; 軸索伸長; モノクローナル抗体; 僧帽細胞; ガイダンス; マウス; lot1抗原

発生時に、嗅球の僧帽細胞の軸索は終脳の外側表面を選択的に伸長し、嗅索を形成する。我々は、僧帽細胞の軸索伸長経路である予定嗅索領域に結合するモノクローナル抗体のスクリーニングを行い、嗅索周辺を特異的に認識するモノクローナル抗体MAblotl(31C2を改名)を得た。この抗体の認識する抗原分子(lotl抗原)は、僧帽細胞軸索伸長の時空間的なパターンに非常に良く一致して発現する。このような発現パターンをもつ分子はこれまでに知られておらず、本研究ではこのlot抗原分子の単離精製を目指した。当初計画していたように、様々な方法により可溶化した蛋白質から、MAblotlにより抗原分子の免疫沈降を試みたが、成功しなかった。失敗の原因はおそらく蛋白質を界面活性剤で可溶化する過程で抗原決定部位が変性してしまったためだと思われる。この結果から免疫沈降により抗原分子を精製することは不可能であると結論し、発現クローニングによるlot抗原分子の同定に戦略を変更した。MAblotlの抗原決定部位は非常に変性しやすいため、発現クローニングを行うためにはなるべくnativeに近い構造のlot抗原を発現させる必要がある。そこで、培養動物細胞(COS細胞)にcDNA発現ライブラリーを導入して強制発現させ、その中からMAblotlで染色される細胞を生じるクローンをスクリーニングする事にした。現在lot抗原が最も強く発現しているマウス14.5日胚の副嗅球からmRNAを調製して、cDNA発現ライブラリーを作成中である。

When the disease occurs, the axon of the mitral cells of the olfactory bulb and the outer surface of the terminal block are elongated and the olfactory cord is formed. I have determined the axonal elongation path of the mitral cell and the binding of the olfactory cord area to the mitral cell. The specific するモノクローナル antibody MAblotl (renamed 31C2) was obtained by を行い and the olfactory cord circumference. The recognition of the antibody's antigen molecule (lotl antigen) and the time and space of the mitral cell axonal elongation are very consistent and consistent.このような発成パターンをもつmolecule はこれまでに知られておらず, this study was carried out by ではこのlot antigen molecule の単利refined した. The original plan was to use the method of solubilizing proteins, MAblotl to test antigen molecules, and the test of immunoprecipitation, and to succeed. The reason for the failure is the process of protein は お そ ら く protein を interface activity で solubilization す る process で epitope が て し ま っ た め だ と 思 わ れ る.このRESULTSからimmunoprecipitationによりantigen moleculesをrefinedすることはimpossibleであると knot On し, 発 appear now クローニングによるlot antigen molecule の Same determination に戦 slightly を変 した. MAblotl's epitope is very specialうためにはなるべくnativeにNearlyいstructuralのlotantigenを発appearsさせるnecessaryがある.そこで、Cultivated animal cells (COS cells) にcDNA 発appearライブラリーを introduction してforced 発行させ、その中からMAblotl で staining される cells を生じるクローンをスクリーニングする事にした. At present, the lot antigen is the strongest and the mRNA is modulated in the accessory olfactory bulb of the 14.5-day embryo, and the cDNA is produced in it.

项目成果

T.Kitsukawa et al.: "Neuropilin-Semaphorin III/d-mediated Chemorepulsive Signals play a Crucial role in prripheral nerve Projection in mice" Neuron. 19. 995-1005 (1997)

T.Kitsukawa 等人：“Neuropilin-Semaphorin III/d 介导的化学脉冲信号在小鼠周围神经投射中发挥着至关重要的作用”Neuron。

平田たつみ 佐藤泰史: "マウス終脳培養を用いた軸索ガイダンス機構の解析" 細胞工学. 18. 77-83 (1999)

Tatsumi Hirata 和 Yasushi Sato：“利用小鼠端脑培养物分析轴突引导机制”《细胞工程》18. 77-83 (1999)。