嗅索形成への関与が期待される31C12抗原の発現解析および構造決定

有望参与嗅道形成的31C12抗原的表达分析和结构测定

• 批准号: 09780678
• 负责人: 平田 たつみ
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780678/
• 关键词: 神経; 軸索伸長; モノクローナル抗体; 僧帽細胞; ガイダンス; マウス; lot1抗原

発生時に、嗅球の僧帽細胞の軸索は終脳の外側表面を選択的に伸長し、嗅索を形成する。我々は、僧帽細胞の軸索伸長経路である予定嗅索領域に結合するモノクローナル抗体のスクリーニングを行い、嗅索周辺を特異的に認識するモノクローナル抗体MAblotl(31C2を改名)を得た。この抗体の認識する抗原分子(lotl抗原)は、僧帽細胞軸索伸長の時空間的なパターンに非常に良く一致して発現する。このような発現パターンをもつ分子はこれまでに知られておらず、本研究ではこのlot抗原分子の単離精製を目指した。当初計画していたように、様々な方法により可溶化した蛋白質から、MAblotlにより抗原分子の免疫沈降を試みたが、成功しなかった。失敗の原因はおそらく蛋白質を界面活性剤で可溶化する過程で抗原決定部位が変性してしまったためだと思われる。この結果から免疫沈降により抗原分子を精製することは不可能であると結論し、発現クローニングによるlot抗原分子の同定に戦略を変更した。MAblotlの抗原決定部位は非常に変性しやすいため、発現クローニングを行うためにはなるべくnativeに近い構造のlot抗原を発現させる必要がある。そこで、培養動物細胞(COS細胞)にcDNA発現ライブラリーを導入して強制発現させ、その中からMAblotlで染色される細胞を生じるクローンをスクリーニングする事にした。現在lot抗原が最も強く発現しているマウス14.5日胚の副嗅球からmRNAを調製して、cDNA発現ライブラリーを作成中である。

During development, the axons of the olfactory bulb's mitre cells are elongated and the olfactory cords are formed on the outer surface of the terminal. We obtained the antibody MAblotl(31C2) by binding to the axonal elongation pathway of mitotic cells in a predetermined olfactory domain. The antigen molecule (lotl antigen) recognized by the antibody is very consistent with the time and space of mitotic cell axonal elongation. This study is aimed at the purification of many antigen molecules. In the beginning, the method of solubilizing protein and MAblotl and immunizing antigen molecules was successfully developed. The reason for this failure is that the protein interface is active and solubilized, and the antigen-determining site is changed. The results showed that the purification of antigen molecules was impossible, and the identification of antigen molecules was difficult. MAblotl antigen determining site is very different, the discovery is very different. The cDNA expression in cultured animal cells (COS cells) was induced by stress, and the MAblotl staining was induced by stress. Now the most powerful antigen is produced in the 14.5-day embryo accessory olfactory bulb mRNA modulation and cDNA production.

项目成果

T.Kitsukawa et al.: "Neuropilin-Semaphorin III/d-mediated Chemorepulsive Signals play a Crucial role in prripheral nerve Projection in mice" Neuron. 19. 995-1005 (1997)

T.Kitsukawa 等人：“Neuropilin-Semaphorin III/d 介导的化学脉冲信号在小鼠周围神经投射中发挥着至关重要的作用”Neuron。

平田たつみ 佐藤泰史: "マウス終脳培養を用いた軸索ガイダンス機構の解析" 細胞工学. 18. 77-83 (1999)

Tatsumi Hirata 和 Yasushi Sato：“利用小鼠端脑培养物分析轴突引导机制”《细胞工程》18. 77-83 (1999)。