オピオイド受容体とアミノ酸配列相同性を有する受容体GPR7、8の薬理学的解析

与阿片受体氨基酸序列同源的受体GPR7和8的药理分析

• 批准号: 09780734
• 负责人: 池田 和隆
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780734/
• 关键词: GPR7; GPR8; オピオイド受容体; アフリカツメガエル卵母細胞; EGFP; GIRKチャネル; アフリカツメガエル

オピオイド受容体とアミノ酸配列相同性を有するGPR7、8の二つの分子は、オピオイド受容体と同様の重要な生理的機能を担っている可能性があるにもかかわらず、現在までほとんど解析がなされていない。本研究はGPR7、8の薬理学的特性を明らかにすることを目的とし、アフリカツメガエル卵母細胞蛋白質発現系および動物培養細胞発現系を用いて解析を行った。まずGPR7、8のCDNAをPCRを用いてクローニングし、アフリカツメガエル卵母細胞蛋白質発現系で効率的に蛋白質が発現するpSP35Tベクターに組み入れた。それぞれのベクターを鋳型として用いてGPR7,8特異的メッセンジャーRNAを生体外で合成し、アフリカツメガエル卵母細胞に注入した。このとき、オピオイド受容体と共役することが知られているG蛋白質活性型内向き整流性カリウムチャネル(GIRK)のメッセンジャーRNAを同時に注入した。これらの卵母細胞に対する各種のオピオイドリガンドの効果を電気生理解析装置を用いて検討した結果、GPR7に関してはいくつかのリガンドにおいて小さいながらも内向き電流応答が得られた。このことは、GPR7がGIRKチャネルと共役する可能性を示唆しており、GPR7の細胞内情報伝達経路を初めて示すものである。次に、GPR7、8を蛍光蛋白質(EGFP)との融合蛋白質として発現するようにベクターを準備し、HEK細胞、COS細胞などの動物培養細胞に発現させた。いずれの融合蛋白質とも細胞膜近傍に局在することが明らかになり、GPR7,8が細胞膜上で機能することが示唆された。本研究でGPR7,8を安定発現する細胞系統の確立に成功したので、これらの細胞を使うことで今後さらにGPR7,8の薬理学的特性を明らかにできると考える。

The two molecules of GPR7 and 8 have the same sequence identity between the two receptors. The two receptors have the same physiological function. In this study, the biological characteristics of GPR7 and 8 were analyzed for the purpose of analyzing the use of oocyte protein production systems and animal culture cell production systems. PCR of cDNA of GPR7 and 8 was used to detect protein expression in oocyte protein development system. In vitro synthesis of GPR7,8-specific RNA and injection of GPR7,8-specific RNA into oocytes In addition, the G protein active type inward rectifier gene (GIRK) and the G protein receptor gene (GIRK) are injected simultaneously. The results of the electrophysiological analysis of the oocytes were analyzed using a variety of electrophysiological analysis devices, and GPR7 was used to analyze the results of the electrophysiological analysis. GPR7 is the first to show the possibility of GIRK production and service. The fusion protein of EGFP and GPR7 and 8 was developed in HEK cells, COS cells and cultured animal cells. The fusion protein is located near the cell membrane and functions on the cell membrane of GPR7,8. In this study, the successful establishment of cell systems for the stable development of GPR7,8 and the subsequent investigation of the biological properties of GPR7,8 were reported.

项目成果

Kobayashi,T.: "Effects of sigma ligands on the nociceptin/orphanin FQ receptor co-expressed with the G-protein-activated K^+ channel in Xenopus oocytes." Br.J.Pharmacol.120. 986-987 (1997)

Kobayashi,T.：“西格玛配体对爪蟾卵母细胞中与 G 蛋白激活的 K^ 通道共表达的伤害感受肽/孤啡肽 FQ 受体的影响。”

Ikeda,K.: "Functional coupling of the nociceptin/orphanin FQ receptor with the G-protein-activated K^+(GIRK) channel." Molecular Brain Research. 45. 117-126 (1997)

Ikeda,K.：“伤害感受肽/孤啡肽 FQ 受体与 G 蛋白激活的 K^ (GIRK) 通道的功能耦合。”

Ikeda, K.: "Distribution of prepro-noiciceptin/orphanin FQ mRNA and its receptor mRNA in developing nd adult mouse central nervous systems." J.Comp.Neurol.399. 139-151 (1998)

Ikeda, K.：“前伤害感受肽原/孤啡肽 FQ mRNA 及其受体 mRNA 在发育中的成年小鼠中枢神经系统中的分布。”

Kobayashi, T.: "Effects of clozapine on the δ- and κ-opioid receptors and the G-protein-activated K^+(GIRK)channel expressed in Xenopus oocytes." Br.J.Pharmacol.123. 421-426 (1998)

Kobayashi, T.：“氯氮平对爪蟾卵母细胞中表达的 δ- 和 κ-阿片受体以及 G 蛋白激活的 K^+(GIRK) 通道的影响。” Br.J.Pharmacol.123（ 1998）

Ikeda, K.: "Functional coupling of the nociceptin/orphanin FQ receptor with the G-protein-activated K^+(GIRK)channel." Molecular Brain Research. 45. 117-126 (1997)

Ikeda, K.：“伤害感受肽/孤啡肽 FQ 受体与 G 蛋白激活的 K^ (GIRK) 通道的功能耦合。”