オピオイド受容体cDNAを用いたリガンドの性質分析とその行動薬理学的解析への応用

阿片受体 cDNA 的配体特性分析及其在行为药理学分析中的应用

• 批准号: 08780758
• 负责人: 池田 和隆
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780758/
• 关键词: オピオイド受容体; ノシセプチン受容体; GIRKチャネル; オピオイドリガンド; ノシセプチン; シグマリガンド; テ-ルフリックテスト; 行動薬理学

快・不快情動が発現する際の脳活動の動態を分子レベルで解明することを最終的な目標とし、その出発点として、オピオイドリガンドのオピオイド受容体活性化能をクローン化したカリウムチャネルとアフリカツメガエル卵母細胞蛋白質発現系を用いることで解析した。さらにこの結果を鎮痛効果測定装置を用いた行動薬理学的解析に応用することを試みた。まず第一に、オピオイド受容体、ノシセプチン受容体がカリウムチャネル(mGIRK1)とカップリングすることを明らかにした(研究発表1、2)。次にこのカップリングを利用して、各種内在性オピオイドリガンド(ノシセプチン、メチオニンエンケファリン、ロイシンエンケファリン、βエンドルフィン、ダイノルフィン)のノシセプチン受容体、μ、δ、κオピオイド受容体の全てに対する受容体活性可能を検討した。その結果、ノシセプチンがノシセプチン受容体に高い選択性を示すのに対して、他のリガンドはノシセプチン受容体以外の受容体に対して比較的選択性の低いアゴニストとして作用することが明らかとなった(研究発表1)。さらに各種シグマリガンド(SKF10047、シクラゾシン、3PPP、DTG、カルビタペンタン、ハロペリドール)の受容体活性可能を検討した結果、シグマリガンドのいくつかは受容体に対してアゴニストあるいはアンタゴニストとして作用することが明らかとなった(研究発表3、4)。これらの生体外実験系で得られた結果を行動薬理学的解析に応用するため、まずモルヒネによる鎮痛作用を本研究の主要実験設備であるテ-ルフリック鎮痛測定装置を用いて測定した。モルヒネの投与量に従い鎮痛作用が定量的に解析できた。今後は、各種のリガンドをマウスに投与して鎮痛作用を測定し、生体内で鎮痛作用が発現する際にどの種のオピオイド受容体がどの様に関与しているのかを明らかにする予定である。

最终的目标是在分子水平表达愉悦和不适时阐明大脑活动的动力学，而起点是通过使用克隆钾通道和Xenopus oocyte蛋白质蛋白质表达系统来分析阿片受体受体的激活能力。此外，我们尝试使用镇痛作用测量装置将此结果应用于行为药理分析。首先，据揭示了阿片受体Nocteptin受体与钾通道结合（MGIRK1）（研究表现1，2）。接下来，使用这种耦合，我们研究了各种内源性阿片类药物（Nociceptin，甲硫氨酸enkephalin，leucine enkephalin，leucine enkephalin，β-雌激素和β-雌激素）的所有NociTPTIN受体（μ，δ和Kappa阿片受体）上激活受体的能力。结果，据揭示了诺耐匹肽对nocteptin受体的选择性很高，而其他配体则作为激动剂，对除nocceptin受体以外的受体的选择性相对较低（研究表现1）。此外，我们研究了激活各种Sigma配体的受体（SKF10047，Cyclazosin，3ppp，DTG，Carbitapentane，Haloperidol）的能力，发现某些Sigma配体作为受体的激动剂或拮抗剂（研究出版3，4）。为了将这些体外实验系统获得的结果应用于行为药理分析，首先使用Telflick镇痛测量装置（本研究的主要实验设施）测量吗啡的镇痛作用。可以根据吗啡的剂量定量分析镇痛作用。将来，将向小鼠施用各种配体以测量镇痛作用，并阐明当体内发生镇痛作用时涉及哪些阿片类受体。

项目成果

Ikeda,K.: "Comparison of the three mouse G-protein-activated K^+ (GIRK) channel and functional couplings of the opioid receptors with the GIRK1." Annals of the New York Academy of Sciences. 801. 95-109 (1996)

Ikeda,K.：“三种小鼠 G 蛋白激活 K^ (GIRK) 通道的比较以及阿片受体与 GIRK1 的功能耦合。”

Kobayashi,T.: "Effects of sigma ligands on the cloned μ-,δ-,and κ-opioid receptors co-expressed with G-protein-activated K^+ (GIRK) channel in Xenopus oocytes." Br.J.Pharmacol.119. 73-80 (1996)

Kobayashi, T.：“西格玛配体对爪蟾卵母细胞中与 G 蛋白激活的 K^+ (GIRK) 通道共表达的克隆 μ-、δ- 和 κ-阿片受体的影响。” .119.73-80（1996）

Ikeda,K.: "Functional coupling of the nociceptin/orphanin FQ receptor with the G-protein-activated K^+ (GIRK) channel." Molecular Brain Research. (印刷中).

Ikeda, K.：“伤害感受肽/孤啡肽 FQ 受体与 G 蛋白激活的 K^+ (GIRK) 通道的功能耦合。”（正在出版）。

Kobayashi,T.: "Effects of sigma ligands on the nociceptin/orphanin FQ receptor co-expressed with the G-protein-activated K^+ channel in Xenopus oocytes." Br.J.Pharmacol.(印刷中).

Kobayashi, T.：“西格玛配体对爪蟾卵母细胞中与 G 蛋白激活的 K^+ 通道共表达的伤害感受肽/孤啡肽 FQ 受体的影响”（Br.J.Pharmacol）。