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腎臓における水の再吸収を制御する新規生理活性ペプチドの精製、構造解析

控制肾脏水重吸收的新型生物活性肽的纯化和结构分析

基本信息

批准号：
10770058
负责人：
片渕剛
金额：
$ 1.22万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770058/
关键词：
cAMP カルシトニン CGRP 生理活性ペプチド

项目摘要

本年度は前年度において精製、構造決定に成功した新しいアミノ酸配列を持つ生理活性ペプチドに対して主として遺伝子工学的な解析を行った。PCR法を用いてプローブを得た後、ブタ脳より作成したcDNAライブラリーに対してスクリーニングを行い、完全長のクローンを得た。シークエンス及びアミノ酸配列への翻訳の結果、このペプチドは前駆体を含めてカルシトニン関連ペプチド(CGRP)と60%程度の相同性を持っていることが判明した。次に遺伝子の構造を解析した結果、このペプチドはカルシトニン/CGRP遺伝子のカルシトニンをコードするエクソンを欠いたような構造であった。このペプチドの組織発現量を測定するためにノーザン解析を行ったところ、中枢においては視床下部、中脳など、末梢では主として甲状腺にバンドが検出された。またこのペプチドの特異的抗体を作成して組織含量を測定した結果、甲状腺等にも免疫活性が見られたが、脳下垂体に大量に非常に高い免疫活性が観察された。従って本ペプチドは中枢神経においては視床下部で合成され、細胞内輸送により脳下垂体に運ばれた上でそこから分泌されるという神経ペプチドにしばしば見られる分泌様式をとっていると考えられる。次にカルシトニン及びCGRP受容体を遺伝子工学的に発現させて合成ペプチドによる細胞内cAMP産生の測定を行ったところ、その構造上の類似性から考えられる結果とは異なり、CGRPではなくカルシトニン受容体に強く作用することが明らかになった。当初このペプチドは腎上皮細胞の細胞内cAMP濃度を上昇させる作用を持つことから水の再吸収に関係していると予想されたが、以上の結果からカルシウム代謝に関係する生理作用を有することが示唆される。

This year, compared with the previous year, we have successfully refined and determined the new acid sequence, and carried out the analysis of the biological activity of the host. The PCR method was used to obtain the cDNA fragments, and the cDNA fragments were obtained completely. The results show that the similarity between CGRP and 60% of the precursor is maintained. The structure of the secondary gene is analyzed and the structure of the secondary gene is analyzed. The tissue production of the thyroid gland was determined by the analysis of the thyroid gland, the central part of the thyroid gland, and the central part of the thyroid gland The results of tissue content determination, thyroid and other immune activities were observed, and a large number of very high immune activities were observed in the pituitary. The central nervous system is composed of the lower part of the optic bed, the intracellular transport, the upper part of the optic bed, and the middle part of the optic bed. The results of the study on the structural similarity between CGRP and CGRP receptor showed that CGRP had a strong effect on intracellular cAMP production. The effect of increasing intracellular cAMP concentration in renal epithelial cells at the beginning of this study is expected to be related to water reuptake. The above results indicate the physiological effect of increasing intracellular cAMP concentration in renal epithelial cells.