放射線による塩基除去修復過程でのpolβ及びPCNA依存性経路の役割に関する研究

polβ和PCNA依赖性途径在辐射诱导碱基切除修复过程中的作用研究

• 批准号: 12771120
• 负责人: 三浦 雅彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771120/
• 关键词: PCNA; DNA polymerase β; DNA repair; Base excision repair; iouizing radiation; ionizing radiation

DNA polymerase β(pol β)(-/-)およびpol β(+/+)細胞を用いた解析から、電離放射線照射後に起こる塩基除去修復経路においては、少なくとも細胞死という観点からみた場合、pol β依存性経路の寄与が小さく、もう一つのPCNA依存性経路が主に機能している可能性が示された。実際、照射後クロマチン結合型PCNAの動態は、po1 β(1-/-)およびpol β(+/+)細胞において差を認めず、両者同様に機能していた(Radiat. Res., 153, 773-780, 2000)。さらに、オワンクラゲ由来の蛍光タンパクGFPとpol βとの融合タンパクを細胞に発現させ、放射線照射後のクロマチン結合型pol βが検出できるかどうかを検討し、pol βが電離放射線照射後のDNA修復に全く関わっていないのか直接調べることを試みた。松影博士(日本女子大)より供与されたrat pol β cDNAを鋳型にPCRによってfull coding regionを増幅し、クロンテック社のpEGFP-C1にフレームがずれないように組み込み、発現用プラスミドとした。これを、ヒト扁平上皮癌細胞に一過性に発現させたところ、核に局在することを確認した.そこで、pol βの関与が明らかであるMMS処理を行い、0.3%Triton-Xにて処理後、蛍光顕微鏡にて観察すると、全く蛍光は認められなくなった。処理時間等の検討を行ったが、この方法にてクロマチン結合型pol βを検出することは今の所できていない。このことは、pol βとDNAとの結合力が、PCNAとは異なり非常に弱い可能性を示しており、他の方法を現在模索中である。これが可能になれば、その条件で電離放射線照射後のクロマチン結合型pol βの有無を検出できるはずである。また、pol βの欠失変異体とGFPとの融合タンパクを発現させ、pol βの核移行シグナル領域を検討したところ、N末1-100番目のアミノ酸領域まで限定することができた。さらに、領域をしぼり、ドメインを現在同定中である。

DNA polymerase β (pol β) (-

项目成果

Miura et al.: "Dynamic changes in subnuclear NP95 location during the cell cycle and its spatial relationship with DNA replication foci"Experimental Cell Research. 263. 202-208 (2001)

Miura等人：“细胞周期中亚核NP95位置的动态变化及其与DNA复制焦点的空间关系”实验细胞研究。

Miura et al.: "Biological response to ionizing radiation in mouse embryo fibroblasts with targeted disruption of the DNA polymerase βgene"Radiation Research. 153. 773-780 (2000)

Miura 等人：“通过靶向破坏 DNA 聚合酶 β 基因对小鼠胚胎成纤维细胞中电离辐射的生物反应”辐射研究 153. 773-780 (2000)。

Miura, M. et al.: "Biological Response to ionizing radiation in mouse embryo fibroblosts with a targeted disruption of the DNA polymerase β gene"Radiation Research. 153. 773-780 (2000)

Miura, M. 等人：“通过靶向破坏 DNA 聚合酶 β 基因对小鼠胚胎成纤维细胞中电离辐射的生物反应”辐射研究 153. 773-780 (2000)。

Miura, M. et al.: "Dynamic changes in subnuclear NP95 losation during the cell cycle and its spatial relationship with DNA repication fo."Experimental Cell Research. 263. 202-208 (2001)

Miura, M. 等人：“细胞周期中亚核 NP95 丢失的动态变化及其与 DNA 复制的空间关系。”实验细胞研究。

Tezuka, M. et al.: "antiapoptotic aceivity is dispensable for insulin-like growth factor-I receptor-mediated clonogenic radioresistance after-irradiation"Clinical Cancer Research. 7. 3206-3214 (2001)

Tezuka, M. 等人：“抗凋亡活性对于胰岛素样生长因子-I 受体介导的辐射后克隆放射抗性来说是可有可无的”临床癌症研究。