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PCNAに対するアンチセンスオリゴ導入による腫瘍細胞の放射線増感の試み

尝试通过引入针对 PCNA 的反义寡核苷酸来使肿瘤细胞放射增敏

基本信息

批准号：
09771565
负责人：
三浦雅彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、DNA複製並びにヌクレオチド除去修復、塩基除去修復のaltemativepathwayに必須なproliferating cell nuclear antigen(PCNA)の細胞内発現を、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理によって低下させ、細胞の放射線増感効果が得られるかどうかを目的として行われた。このために、PCNA cDNA塩基配列の先頭のメチオニン(ATG)を含む16merからなる3つの異なるセンス、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド(S-オリゴ)を作製した。細胞内への取り込み効率の増加を図るためにリポソームでオリゴを被覆して、最終濃度が500nMになるようにマウス胎児由来線維芽細胞を処理した。これを1日毎に繰り返し4日まで処理を行った。経時的にWestern blotによってPCNAタンパクレベルを測定したところ、いずれのアンチセンス処理においても、4日めまで有意な低下は認められなかった。これ以上オリゴ濃度を上げることは細胞毒性を考えると不可能であった。これはおそらく、PCNAの細胞内含量及びそのタンパク安定性が非常に高いため細胞毒性が起こるような高濃度のオリゴでも容易にPCNAレベルが低下しないものと考えられた。そこで、筆者は、間接的ではあるが2つの塩基除去修復経路のうち主経路と考えられるpol β依存性修復を欠損する細胞、すなわち、PCNA依存性経路のみ機能する細胞と正常細胞を用いて、電離放射線に対する感受性をコロニー形成法にて調べた。その結果、両者に全く感受性の違いが認められないことを明らかにした。放射線によって多くの塩基損傷が起こり、塩基除去修復によって修復されていることはすでに明らかであり、従って、この結果はpol βがなくとも電離放射線によってできる塩基損傷はPCNA依存性経路によって行われていることを示唆している。より直接的にこのことを示すためには、PCNAレベルをすみやかに低下させるgenetic engineeringが必要であろう。

The aim of this study was to investigate the intracellular production of proliferating cell nuclear antigen(PCNA), the reduction of DNA replication and the reduction of cellular radiosensitivity, which are essential for DNA replication and altemativ pathway repair. The first sequence of PCNA cDNA base sequence (ATG) contains 16mer, 3-mer, 3-mer, 3 Increase in intracellular concentration of vitamin A and vitamin B in vitro The first day of the month, the fourth day of the month. Western blot analysis of PCNA in the middle of the day, the middle of the day It's impossible. The cell content and stability of PCNA were very high. Cytotoxicity was high. PCNA was easy to be detected. The author suggests that the indirect method is to remove the substrate from the repair pathway, to remove the main pathway, to remove the pol β-dependent repair from the damaged cells, to remove the pol β-dependent repair from the damaged cells, to remove the PCNA β-dependent pathway, to remove the functional cells from the normal cells, and to remove the sensitivity of the ionized radiation from the cells. The result is that the person is completely sensitive to the violation. Radiation damage caused by multiple radicals, radical removal, and repair, as a result of which pol β is responsible for ionizing radiation, PCNA-dependent pathway, and so on. The genetic engineering is essential for direct communication.