オンコジーン産物タンパク質Vavの分子認識機構に関する構造生物学的研究

癌基因产物蛋白Vav分子识别机制的结构生物学研究

• 批准号: 12780446
• 负责人: 小椋 賢治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780446/
• 关键词: Vav; SH3ドメイン; 核磁気共鳴; 構造生物学; 核磁気共鳴分光法; シグナル伝達

VavのSH3-SH2-SH3ドメイン領域について,N末端側SH3ドメインとC末端側SH3ドメインに関して立体構造解析を完了し,以下に示す結果を得た.[N末端側SH3ドメイン]このSH3ドメインは,その内部にSH3ドメインの結合標的とされている"プロリンに富む領域"を含んでいる.このSH3ドメインの核磁気共鳴スペクトルを測定し,その立体構造を精密に決定した.さらに,このSH3ドメインに対して,生体内での主要な結合ターゲットであると考えられているGrb2のC末端側SH3ドメインを溶液中で滴定し,核磁気共鳴スペクトルの変化を追跡したところ,両者の結合様式は,一般的な"プロリンに富む領域"を認識する相互作用機構とはまったく異なり,SH3ドメインとしては新規な分子認識機構によることがわかった.この研究成果は雑誌論文として発表した.[C末端側SH3ドメイン]このSH3ドメインは,N末端側SH3ドメインとは異なり,一般的なSH3ドメインの特徴を保持している.このSH3ドメインについて安定同位体試料を作成した.また,その結合標的タンパク質であるhnRNP-K由来の"プロリンに富む領域"を含む合成ペプチドとの複合体の核磁気共鳴スペクトルを測定し,その立体構造を精密に決定した.その結果,両者の相互作用様式は,SH3ドメインの分類法で"マイナス配向"の結合であることがわかった.この結果を基に,VavのN末端側SH3ドメインとC末端側SH3ドメインが結合しうると考え,His-tagプルダウンアッセイをおこなったところ,両ドメインの結合をSDS-PAGEゲル上にて確認した.この結果は,VavのSH3-SH2-SH3ドメイン領域のふたつのSH3ドメインが分子内マスクすることで,標的分子との相互作用のオン・オフを厳密に制御していることを示唆する.この研究成果は,現在雑誌論文として投稿準備中である.

In the field of Vav's SH3-SH2-SH3 equipment, the three-dimensional structural analysis of the N-terminal side SH3 equipment and the C-terminal side SH3 equipment has been completed, and the results shown below are obtained. [N-terminal SH3-side SH3-side SH 3 These 3-D NMR spectra were determined, and the stereo structure was precisely determined. In addition, the main binding mechanism in vivo is to study the interaction mechanism of Grb2 C-terminal SH3-terminal in solution titration. NMR spectra are used to trace the binding mechanism of Grb2 C-terminal SH3-terminal. SH3 New regulations on molecular cognition. The results of this research are presented in the paper. [C-terminal SH3-side SH3-side SH3 This is the first time that a stable isotope sample has been prepared. The NMR spectra of the complexes containing the complex of the bound compounds were determined and the stereo structure of the complexes was determined precisely. As a result, the interaction formula of As a result, the binding of VAV to its N-terminal SH 3-terminal and C-terminal SH 3-terminal was confirmed by SDS-PAGE. As a result, the interaction between the target molecule and the SH3-SH2-SH3 - 4-SH3-SH 3 The results of this research are now in preparation for submission.

项目成果

Kenji Ogura: "Solution Structure of N-terminal SH3 domain of Vav and the recognition site for Grb2 C-terminal SH3 domain"Journal of Biomolecular NMR. 22. 37-46 (2002)

Kenji Ogura：“Vav N 端 SH3 结构域的解决方案结构和 Grb2 C 端 SH3 结构域的识别位点”《生物分子 NMR 杂志》。