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SH3ドメインをもつアダプター蛋白質の活性化と高次構造変化のメカニズム

SH3结构域衔接蛋白的激活和构象变化机制

基本信息

批准号：
11160214
负责人：
住本英樹
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11160214/
关键词：
NADPHオキシダーゼ蛋白質間相互作用 SH3ドメイン p47^<phox>p67^<pho>p40^<pho>Rac Bem1p

项目摘要

食細胞NADPHオキシダーゼの酵素本体は、細胞膜のシトクロムb_<558>(b_<558>)である。本酵素の活性化には、特異的アダプター蛋白質(p47^<phox>,p67^<phox>とp40^<phox>:それぞれSH3ドメインをもつ)と低分子量G蛋白質Racが刺激依存性に細胞質から細胞膜に移行してb_<58>と相互作用する必要がある。平成11年度は以下のような成果を得た。(1)b_<558>と細胞質因子の相互作用は、p47^<phox>SH3ドメインとp22^<phox>(b_<558>の小サブユニット)の細胞質領域との結合に依存するが、p47^<phox>C末領域の3つのセリン残基のリン酸化が、SH3ドメインのunmasking、p22^<phox>との結合、及びオキシダーゼ活性化能誘導に必要であること、更にアラキドン酸がリン酸化と協同的に働いてp47^<phox>の構造変化を引起しオキシダーゼを活性化することを示した。(2)Racの活性化を検出する新しい測定法を開発し、好中球刺激時のRacの上流で作用するシグナル分子を同定した。Racは、p67^<phox>のN末領域に存在するTPRドメインを介して作用し、オキシダーゼを活性化すること明らかにした。(3)p40^<phox>は休止時細胞でp67^<phox>と会合しているが、これは新規なドメイン間(それぞれPCモチーフとPB1ドメイン)の新しいタイプの蛋白質間相互作用によるものであることを示した。PB1ドメインは酵母のシグナル伝達蛋白質Bem1pにも存在し、その役割を明らかにすると共に、その3次構造決定に成功した。(4)p47^<phox>のN末領域に新規ドメイン(PB2ドメイン)を見い出し、その3次構造決定すると共に、PB2ドメインがPIP結合ドメインであり、p47^<phox>の膜移行に必須であることを明らかにした。

Cell NADPH is the enzyme that feeds on the cell <558>membrane<558>. The activity of this enzyme is dependent on stimulation by specific protein (p47^<phox>, p67 ^<phox>and p40^<phox>: all SH3-related proteins) and low molecular weight G protein Rac, which is essential for cytoplasmic and membrane migration<58>. Heisei 11 years later, the following achievements were achieved. (1)b Cytoplasmic <558>factor interactions are dependent on binding to the cytoplasmic domain of p47^<phox>SH3, p22^<phox>(b_<558>(2)), acidification of 3 residues in the terminal domain of p47^<phox>C, unmasking of SH3, binding to p22^, and activation <phox>of p47^<phox>. (2) A new assay for the detection of Rac activation was developed to determine the molecular identity of Rac upstream when stimulated by a good medium. Rac, p67, <phox>N terminal domain, TPR, activation, (3) When p40^<phox>is at rest, the cell p67^converges with each other, and the cell p67 ^converges with each other, and the cell p67 ^converges with each other<phox>. PB1 is a yeast protein that has been successfully constructed for three times. (4)p47^<phox>N end region new rules (PB2) see the middle, three structural decisions, PB2, PIP, p47 <phox>^film transition must be clear.