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SH3ドメインをもつアダプター蛋白質の活性化と高次構造変化メカニズム

SH3结构域衔接蛋白的激活及构象变化机制

基本信息

批准号：
12034216
负责人：
住本英樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

食細胞NADPHオキシダーゼの酵素本体は、細胞膜のシトクロムb_<558>(b_<558>)である。本酵素の活性化には、特異的アダプター蛋白質(p47^<phox>,p67^<phox>とp40^<phox>:各々SH3ドメインをもつ)が刺激依存性に細胞質から細胞膜に移行してb_<558>(gp91^<phox>とp22^<phox>の両サブユニットから成る)と相互作用する必要がある。平成12年度は以下のような成果を得た。(1)b_<558>と細胞質因子の相互作用は、p47^<phox>SH3ドメインとp22^<phox>の細胞質領域との結合に依存するが、p47^<phox>C末領域の3つのセリン残基(Ser-303,304,328)のリン酸化が、SH3ドメインのunmasking、p22^<phox>との結合、及びオキシダーゼ活性化能誘導に必要であることを示し、更にアラキドン酸がリン酸化と協同的に働いてp47^<phox>の構造変化を引起こしオキシダーゼを活性化することを明らかにした。(2)p40^<phox>は休止時細胞でp67^<phox>と会合しているが、これは新規なドメイン間(それぞれPCモチーフとPB1ドメイン)の新しいタイプの蛋白質間相互作用によるものであること、この結合がオキシダーゼ活性化を正に制御していること等を示した。PB1ドメインは酵母のシグナル伝達蛋白質Bem1pにも存在し、その役割を明らかにすると共に、その3次構造決定に成功した。(3)p47^<phox>のN末領域に新規ドメイン(PB2ドメイン)を見い出し、その3次構造決定すると共に、PB2ドメインがPIP結合ドメインであり、p47^<phox>の膜移行に必須であることを明らかにした。(4)腎臓尿細管上皮細胞に高発現している新規gp91^<phox>ホモログ(NOX4と命名)を見い出し、そのcDNAクローニングに成功した。

Cell NADPH is the enzyme that feeds on the cell <558>membrane<558>. The activation of this enzyme is dependent on stimulus-dependent cytoplasmic and membrane-specific interactions with proteins (p47^<phox>, p67 ^<phox>, p40^<phox>: each<558><phox><phox>). Heisei 12 years later, the following achievements were achieved. (1)b Cytoplasmic <558>factor interactions are dependent on p47^<phox>SH3 receptor binding to p22^, <phox>p47^<phox>C terminal domain 3 receptor residues (Ser-303, 304, 328), SH3 receptor unmasking, p22^<phox>binding, and p47^activation<phox>. (2)p40 <phox>is a new type of <phox>protein-protein interaction between cells when p67 is at rest. PB1 is a yeast protein that has been successfully constructed for three times. (3)p47^<phox>N end region new rules (PB2) see the middle, three structural decisions, PB2, PIP<phox>, film migration must be clear. (4)A new method for the identification of renal tubule epithelial cells <phox>(NOX4) was developed.